摘要: 【目的】本研究旨在探究外源保幼激素(juvenile hormone, JH)对草地贪夜蛾Spodoptera frugiperda雌虫卵巢发育及生殖关键基因转录水平的影响。【方法】分离纯化获得草地贪夜蛾雌虫卵黄蛋白，制备多克隆抗体；通过间接酶联免疫吸附分析(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)测定卵黄蛋白在草地贪夜蛾7-8日龄雌蛹和1-10日龄雌成虫脂肪体和卵巢中的含量。使用25μg/头早熟素处理5日龄雌蛹，取初羽化雌成虫外源补充100μg/头JH类似物烯虫酯，随后统计产卵前期、产卵期、单雌产卵量以及孵化率；对3日龄雌成虫进行解剖，观察卵巢发育情况测量卵巢长度并拍照。利用qPCR测定各处理雌成虫卵黄原蛋白(vitellogenin, Vg)及卵黄原蛋白受体(vitellogenin receptor, VgR)基因的表达量。【结果】草地贪夜蛾卵黄蛋白含量随着雌成虫羽化呈现先升高后降低的动态变化，在1日龄时脂肪体中达到高峰，在4日龄时卵巢达到高峰。早熟素处理下调草地贪夜蛾内源JH后卵巢发育较正常饲养的雌成虫空白对照组明显受阻，卵巢抱卵量显著减少，而早熟素处理后外源补充烯虫酯使卵巢基本恢复正常发育。早熟素处理组卵巢平均长度为39.89 mm,较空白对照组的49.79 mm显著缩短；烯虫酯处理组卵巢平均长度为46.67 mm,显著长于早熟素处理组，并与空白对照组没有显著差异。早熟素处理组平均单雌产卵量较空白对照组的1 128.37粒下降至576.33粒，显著下降了48.91%,烯虫酯处理组平均单雌产卵量为806.93粒，显著高于早熟素处理组的。早熟素处理组雌成虫SfVg和SfVgR的表达量与空白对照组相比显著下调，烯虫酯显著促进了SfVg和SfVgR的表达量。【结论】早熟素处理下调草地贪夜蛾内源JH显著干扰了雌虫生殖力，阻碍了卵巢正常发育以及雌成虫SfVg和SfVgR的转录水平，而外源补充JH使雌虫生殖力明显得到了恢复。本研究进一步证实了JH在草地贪夜蛾生殖过程中具有重要调控作用，为后续研究JH调控雌虫生殖的分子机制提供了理论依据。

摘要: 【目的】本研究旨在对前期转录组测序鉴定到的棉铃虫Helicoverpa armigera原肌球蛋白基因HaTm-1进行组织表达谱和RNAi效应分析，探究HaTm-1作为鳞翅目(Lepidoptera)害虫广谱性RNA生物农药靶点的可行性和理论依据。【方法】PCR克隆棉铃虫HaTm-1 cDNA序列并进行生物信息学分析；利用RT-qPCR检测HaTm-1在棉铃虫4龄幼虫不同组织(表皮、脂肪体、中肠、脑、精巢和马氏管)以及2-5龄幼虫表皮中的表达量；通过喷洒dsHaTm-1对棉铃虫和草地贪夜蛾Spodoptera frugiperda 1龄幼虫HaTm-1进行RNAi,分别检测棉铃虫HaTm-1和草地贪夜蛾SfTm-1的表达量以及幼虫体重和幼虫存活率；对棉铃虫4龄幼虫注射dsHaTm-1,检测幼虫体重、蛹重、相对生长速率、相对代谢速率和取食量。【结果】棉铃虫HaTm-1全长cDNA为855 bp (GenBank登录号：XP021201113.1), HaTm-1与多物种中的同源蛋白都有超90%的氨基酸序列一致性。棉铃虫与草地贪夜蛾的Tm-1汇聚在同一分支上，亲缘关系最近。HaTm-1在棉铃虫4龄幼虫表皮中特异性高表达，且在不同龄期幼虫表皮中均有表达，其中在5龄幼虫表皮中表达量最高。与dsEGFP对照组相比，喷洒dsHaTm-1处理棉铃虫1龄幼虫12和24 h时，HaTm-1表达量分别降低了55.73%和50.85%; 168 h时幼虫存活率显著降低，仅为43.33%;处理后72, 120和168 h时幼虫体重分别下降17.67%, 14.65%和18.90%。与dsEGFP对照组相比，喷洒dsHaTm-1处理草地贪夜蛾1龄幼虫12和24 h时SfTm-1表达量分别降低了44.72%和39.65%;144 h时幼虫存活率为60%; 72和120 h时幼虫体重分别下降了13.00%和28.11%。与dsEGFP对照组相比，注射dsHaTm-1处理棉铃虫4龄幼虫24 h时HaTm-1表达量显著降低了55.66%,处理后72和120 h幼虫体重分别下降了50.34%和54.91%,蛹重也下降了13.14%,相对生长速率下降14.00%,相对代谢速率下降15.66%,取食量下降14.50%。取食消化过程受到影响进而导致了幼虫的死亡。【结论】干扰HaTm-1表达对棉铃虫的取食消化过程至关重要。本研究证明了原肌球蛋白作为潜在RNA生物农药广谱性害虫防治靶标的可行性，为其实际应用提供参考。

摘要: 【目的】鹿眼蛱蝶浓核病毒(Junonia coenia densovirus, JcDV)通过漏扫描方式编码4个病毒结构蛋白(viral structural protein, VP) VP1, VP2, VP3和VP4。本研究旨在探究JcDV的4个结构蛋白基因(vp1-4)在草地贪夜蛾Spodoptera frugiperda幼虫体内的表达特征，为深入研究病毒结构蛋白VP1-4的功能及其组装机制提供依据。【方法】采用免疫荧光检测在转染pJcDV质粒的Hi5细胞内VP1-4的亚细胞定位；利用RT-PCR检测JcDV侵染草地贪夜蛾2龄幼虫后0, 3, 6, 12, 24, 48, 72, 96和120 h时vp1-4的表达量；采用Western blot检测JcDV侵染草地贪夜蛾2龄幼虫后0, 24, 48, 72, 96和120 h时VP1-4的表达量；用免疫组织化学技术检测JcDV侵染草地贪夜蛾2龄幼虫后0, 24和96 h时VP1-4的组织表达特性。【结果】VP1-4主要位于Hi5细胞质中，少量以多聚体形式分布于细胞核内；JcDV侵染草地贪夜蛾2龄幼虫后3 h时可检测到vp1-4的转录并至少持续至120 h; JcDV侵染后24-120 h时可检测到VP1-4的表达；JcDV侵染草地贪夜蛾2龄幼虫后96 h时在虫体的表皮和气管中可检测到VP1-4的表达，而肌肉和脂肪体中没有明显表达信号。【结论】JcDV在侵染草地贪夜蛾2龄幼虫后3和24 h时可分别检测到病毒结构蛋白基因vp1-4的转录和翻译，表明VP1-4可能在侵染早期已开始发挥重要功能；JcDV可侵染草地贪夜蛾幼虫的表皮和气管，可能是导致其死亡的原因之一。

摘要: 【目的】测定药用植物白花丹中重要植物次生物质白花丹素对草地贪夜蛾Spodoptera frugiperda 2龄幼虫的毒力，并明确亚致死浓度(LC₂₅浓度)白花丹素对草地贪夜蛾亲代（F₀）和子一代（F₁）生长发育及解毒酶活性的影响。【方法】白花丹素通过饲料混毒法处理草地贪夜蛾2龄幼虫（蜕皮后的第2天）测定其对草地贪夜蛾的毒力，同时以LC₂₅浓度（0.343 mg/g）白花丹素处理草地贪夜蛾2龄幼虫，统计记录F₀代与F₁代幼虫历期、化蛹率、蛹历期、雌雄成虫寿命和成虫单雌产卵量，构建年龄-龄期两性生命表。LC₂₅浓度白花丹素处理草地贪夜蛾2龄幼虫24 h后，测定羧酸酯酶（carboxylesterase, CarE）、谷胱甘肽S-转移酶（glutathione S-transferase, GST）和细胞色素P450单加氧酶（cytochrome P450 monooxygenase, CYP450） 3种解毒酶的活性。【结果】白花丹素对草地贪夜蛾2龄幼虫7 d内的致死中浓度(median lethal concentration, LC₅₀)和LC₂₅值分别为0.607和0.343 mg/g。与溶剂对照（0.1%丙酮）对比，LC₂₅浓度白花丹素处理草地贪夜蛾2龄幼虫后亲代（F₀）的化蛹率显著下降了25.13%,雌雄蛹历期分别显著缩短了1.29和1.08 d,成虫的单雌产卵量显著下降了47%,产卵期和成虫寿命分别显著降低了1.75和1.19 d;子代（F₁）的平均世代周期（mean generation time,T）显著缩短了0.91 d。LC₂₅浓度白花丹素处理草地贪夜蛾2龄幼虫24 h可显著诱导其体内CarE, GST和CYP450 3种解毒酶活性，分别为溶剂对照的1.28, 1.30和1.42倍。【结论】LC₂₅浓度白花丹素对亲代（F₀）草地贪夜蛾的生长发育和繁殖产生明显的不利影响，且处理草地贪夜蛾2龄幼虫24 h可显著提高3种解毒酶CarE, GST和CYP450酶活性，该结论有助于将植物次生物质白花丹素作为防治草地贪夜蛾的潜在生物防治手段。

摘要: 【目的】探究肿柄菊Tithonia diversifolia中萜类化合物对斜纹夜蛾Spodoptera litura幼虫的毒力及其体内乙酰胆碱酯酶（acetylcholinesterase, AChE）和解毒酶活性的影响，筛选防治斜纹夜蛾新的活性成分。【方法】斜纹夜蛾3龄幼虫用分别添加S-烯虫酯（阳性对照）和不同浓度萜类化合物的饲料饲喂，通过室内生物测定评价角鲨烯、氧化石竹烯和α-蒎烯3种萜类化合物处理10 d内对斜纹夜蛾幼虫的胃毒活性，处理后7 d时测定幼虫的体重；采用酶联免疫吸附法，测定不同浓度氧化石竹烯处理3 d对斜纹夜蛾幼虫体内AChE、羧酸酯酶（carboxylesterase, CarE）、细胞色素P450（cytochrome P450, CYP450）和谷胱甘肽S-转移酶（glutathione S-transferase, GST）活性的影响；最后采用分子对接技术模拟角鲨烯、氧化石竹烯和α-蒎烯与AChE, CarE, CYP450和GST的结合力及结合位点。【结果】斜纹夜蛾3龄幼虫取食添加不同浓度萜类化合物的饲料3-5 d内，1×10^-4～1×10^-1 mg/mL氧化石竹烯对其表现出显著的杀虫活性，引起的幼虫校正死亡率显著高于角鲨烯、α-蒎烯及阳性对照。处理后7 d,氧化石竹烯显著抑制斜纹夜蛾幼虫体重增长，且高浓度氧化石竹烯处理组(1×10^-1 mg/mL)幼虫体重显著低于阳性对照组。1×10^-5～1×10^-3 mg/mL氧化石竹烯处理后3 d斜纹夜蛾幼虫体内AChE, CarE和GST活性较阳性对照组显著降低，CYP450活性较溶剂对照组（95%乙醇）显著降低，其中，氧化石竹烯测试浓度为1×10^-1 mg/mL时，幼虫体内AChE活性呈负值。分子对接结果进一步揭示，氧化石竹烯与AChE的结合力最强，低于其与CarE, CYP450和GST的结合自由能力。【结论】氧化石竹烯对斜纹夜蛾幼虫具有较高的毒力，通过抑制AChE活性对斜纹夜蛾产生毒杀作用，其具有作为绿色防控资源的潜在应用价值，为肿柄菊萜类化合物的开发与利用提供了新思路。