摘要: 对如何有效地从乙醇保存的叶螨中抽提核基因组DNA作了探讨.70%乙醇保存的叶螨标本.经过干燥,TEN洗涤,蛋白酶K消化,酚-氯仿抽提,2倍体积无水乙醇沉淀等步骤.得到叶螨核基因组DNA沉淀.再用TE或无菌水溶解后.以其为模板,进行随机引物PCR扩增.结果显示.该方法抽提的DNA无Taq酶抑制物.且其纯度达到进行PCR反应对模板要求的程度.这为采用AP-PCR技术研究螨的系统分类提供了便利.

摘要: 根据二点叶螨线粒体COI基因序列设计1对PCR引物,对叶螨科不同种属的线粒体COI基因中央区段进行了PCR扩增.结果表明该对引物能成功扩增叶螨科7属9种叶螨的约340bp的同源片段.由于叶螨DNA序列资料非常有限,扩大引物的使用范围成为快速获得特定基因序列的有效途径.研究结果使根据叶螨线粒体COI基因序列信息探索其系统演化成为可能.另外,还对模板DNA分离方法进行了优化.

摘要: 【目的】载脂蛋白D(apolipoprotein D, ApoD)是一类参与代谢、组织发育、免疫和抗氧化等多项生物功能的胞外蛋白，是抗衰老和延长寿命的重要分子基础。本研究旨在解析ApoD基因在叶螨基因组中的复制与扩张程度及其系统发育，探讨多功能ApoD基因对二斑叶螨Tetranychus urticae的寿命和生殖的影响。【方法】联合使用BLASTP, HMMER, TBLASTN和GEMOMA鉴定番茄刺皮瘿螨Aculops lycopersici、截形叶螨Tetranychus truncatus和二斑叶螨基因组中ApoD家族基因；采用最大似然法构建细菌、真菌、植物、哺乳动物、昆虫、瘿螨和叶螨的ApoD系统发育树；依据二斑叶螨在不同发育阶段(卵、若螨、1日龄雌成螨和5日龄雌成螨)和不同寄主植物(菜豆、拟南芥Arabidopsis thaliana、番茄、茄子、棉花和黄瓜)上若螨或成螨的ApoD家族基因表达谱，挑选出ApoDR2,ApoD9,ApoD17和ApoD24 4个基因，采用dsRNA浸泡法对新羽化的二斑叶螨雌成螨进行ApoDR2,ApoD9,ApoD17和ApoD24的RNAi,并检测10 d内的存活率和单雌日均产卵量。【结果】二斑叶螨基因组中鉴定到68个ApoD基因，近缘种截形叶螨有33个ApoD基因，番茄刺皮瘿螨仅有1个ApoD基因，叶螨科之外的生物普遍拥有1～10个ApoD基因。系统发育分析结果表明，叶螨的ApoD家族主要分为三大簇，分别与昆虫、瘿螨和真菌的脂质转运蛋白基因聚类；叶螨中剧烈扩张的ApoD支系与真菌ApoD基因存在多个特有的一致性位点，且最大似然树显示亲缘关系近。大部分ApoD基因在二斑叶螨若螨和成螨期高水平表达，在二斑叶螨取食不同寄主植物时呈现多样的表达调控模式。与对照相比，沉默ApoDR2和ApoD9对二斑叶螨的适合度无显著影响，沉默ApoD17和ApoD24显著降低了二斑叶螨10 d内存活率和单雌日均产卵量，其中沉默ApoD17对二斑叶螨的存活率和单雌日产卵量影响较大。【结论】推测真菌源水平转移后获得的ApoD基因在叶螨基因组中剧烈扩张，并且对二斑叶螨的寿命和生殖产生了不同程度的影响，但是其在叶螨中的多功能性有待进一步研究。

摘要: 【目的】本研究旨在探明朱砂叶螨Tetranychus cinnabarinus几丁质降解通路中的关键酶β-N-乙酰己糖胺酶基因(TecHEX3)在螨蜕皮发育中的功能，为开发新型安全的防治害螨生物农药奠定基础。【方法】利用PCR克隆朱砂叶螨TecHEX3,并进行生物信息学分析。利用RT-qPCR检测TecHEX3在朱砂叶螨不同发育阶段(卵、幼螨、若螨和成螨)以及饲喂蜕皮激素20-羟基蜕皮酮(20-hydroxyecdysone, 20E)的若螨中的表达量。通过饲喂法进行朱砂叶螨雌成螨和若螨TecHEX3的RNAi,分析沉默效率，统计并观察朱砂叶螨若螨的死亡率和致死表型。【结果】成功克隆了朱砂叶螨TecHEX3(GenBank登录号：OR413561),其编码蛋白具有典型的20糖苷水解酶家族结构特征；系统发育树表明TecHEX3与二斑叶螨T.urticae TuHEX3的亲缘性最高且均属于β-N-乙酰己糖胺酶Ⅳ型。TecHEX3在朱砂叶螨不同发育阶段都有表达，在成螨期表达量最高；饲喂500 ng/μL的20E对TecHEX3的表达有最好的诱导效果。RNAi结果表明饲喂dsTecHEX3时朱砂叶螨若螨TecHEX3表达量较对照组(饲喂dsEGFP)显著下调81%;沉默TecHEX3导致朱砂叶螨蜕皮困难或蜕皮后形态异常，致死率达40.58%。【结论】TecHEX3参与朱砂叶螨几丁质降解过程，并在朱砂叶螨的蜕皮发育过程中发挥重要作用。

摘要: 【目的】截形叶螨Tetranychus truncatus抗药性演化快，防治难度不断加大，研发微生物杀螨剂迫在眉睫。杀虫真菌爪哇虫草菌Cordyceps javanica JS001菌株已开发为防烟粉虱Bemisi tabaci等害虫的生防药剂。本研究旨在探索爪哇虫草菌对截形叶螨的致病力以及其理想助剂材料，以挖掘爪哇虫草菌对截形叶螨的生防潜力。【方法】采用喷雾法测定爪哇虫草菌JS001菌株1.0×10～6孢子/mL孢子悬浮液侵染后截形叶螨卵、若螨以及成螨的累计死亡率；分别用硅藻土(0.025 g/L)溶液以及添加了硅藻土的爪哇虫草菌JS001菌株孢子悬浮液(1.0×10～6孢子/mL)喷施截形叶螨2日龄成螨，观察记录成螨的感染死亡情况；以硅藻土溶液(0.025 g/L)喷施截形叶螨2日龄成螨，扫描电子显微镜下观察并计算截形叶螨2日龄成螨表皮褶皱间距和单位距离(10μm)内褶皱数。【结果】爪哇虫草菌JS001菌株对截形叶螨的卵未表现出致病力，造成成螨的死亡率为81.75%,显著高于若螨的死亡率(40.91%)。硅藻土能加速爪哇虫草菌JS001菌株对成螨的致死作用，平均存活时间缩短0.6 d。扫描电子显微镜观察结果表明，与对照比较，硅藻土处理能疏松成螨表皮的微阵列结构，相邻褶皱之间的平均距离显著变大，且单位距离(10μm)内的平均褶皱数目显著下降。【结论】爪哇虫草菌JS001菌株对截形叶螨成螨具有较高致病力，硅藻土能改变成螨表皮物理结构并提升爪哇虫草菌JS001菌株的杀螨活性。