摘要: 黄斑蓝子鱼(Siganus oramin)具有天然抗刺激隐核虫(Cryptocaryon irritans)能力,并从其血清中分离纯化了一种抗虫蛋白。以黄斑蓝子鱼皮肤黏液为对象,研究了其对刺激隐核虫(C.irritans)、多子小瓜虫(Ichthyophthirius multifiliis)、布氏锥虫(Trypanosoma brucei brucei)及一些病原菌的杀灭和抑制效果。结果显示:黄斑蓝子鱼黏液对刺激隐核虫、多子小瓜虫和布氏锥虫均具有明显的杀虫效果,黏液蛋白对3种寄生虫的最低杀寄生虫浓度(Minimum Parasiticidal Concentration,MPC)分别为4.0、5.0和3.0 mg/mL。显微镜观察发现,刺激隐核虫和多子小瓜虫的幼虫在经过黄斑蓝子鱼黏液作用后,均出现纤毛脱落、虫体肿胀、外膜破裂和内容物泄漏等现象。黏液抑菌活性实验结果表明,除大肠杆菌(Escherichia coli)外,黄斑蓝子鱼皮肤黏液对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、霍乱弧菌(Vibrio cholerae)、海豚链球菌(Streptococcus iniae)、温和气单胞菌(Aeromonas sobria)、溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)、副溶血弧菌(Vibrio Parahaemolyticus)、星形诺卡氏菌(Nocadia asteroides)和美人鱼发光杆菌杀鱼亚种(Photobacterium damselae subsp.)皆有明显的抑菌效果。在最低抑菌浓度(Minimum Inhibitory Concentration,MIC)测定中,黄斑蓝子鱼黏液对金黄色葡萄球菌、霍乱弧菌、海豚链球菌、溶藻弧菌、温和气单胞菌和副溶血弧菌的MIC分别为0.16、0.16、0.08、0.63、0.63和0.63 mg/mL。黄斑蓝子鱼皮肤黏液对小麦赤霉菌(Gibberella saubinetii)和黑曲霉菌(Aspergillus niger)没有明显抑菌作用。

摘要: 鱼类的L-氨基酸氧化酶(L-amino acid oxidase, LAAO)具有广泛的抑菌杀虫效果,为了解斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)LAAO基因序列特征及其在刺激隐核虫(Cryptocaryon irritans)感染后的表达变化,该试验克隆得到2个石斑鱼LAAO基因:EcLAAO-1和EcLAAO-2,它们的ORF长度分别为1536和1569 bp,编码511和522个氨基酸,均含有氨基酸氧化酶(Amino_oxidase)结构域以及LAAO保守序列:DBM和GG motif。多重序列比对显示石斑鱼LAAO与其他鱼类LAAO具有较高的相似性。系统进化树分析表明,斜带石斑鱼的LAAO与硬骨鱼类亲缘关系较近。实时荧光定量PCR检测结果显示EcLAAO-1和EcLAAO-2在石斑鱼各组织均有表达,其中皮肤、鳃、胸腺、肝脏和肌肉中含量较丰富;在感染刺激隐核虫后,鳃和脾脏EcLAAO-1, EcLAAO-2表达量显著升高(P<0.05),这些结果暗示了石斑鱼LAAO参与先天性免疫,并在抗御刺激隐核虫感染中发挥重要作用。

摘要: CD4作为TCR的共受体可以提高TCR/抗原-MHC复合体的稳定性,辅助TCR识别抗原,并且参与T细胞活化。本研究从斜带石斑鱼Epinepheluscoioides头肾中克隆得到全长2240bp的CD4cDNA序列,该序列包含长1410bp的ORF,编码469个氨基酸,预测蛋白分子包含一段信号肽,4个Ig样区(D1～D4),一个疏水跨膜区和一段胞浆区,具有鱼类CD4典型的结构特征。同源比对显示,其推测的氨基酸序列与其他鱼类CD4氨基酸序列相似性为25%～51%,与人Homo sapiens和鼠Mus musculus的CD4氨基酸序列相似性为13%～15%。RT-PCR分析显示,斜带石斑鱼CD4在脾脏中表达量最高,其次是胸腺和头肾。受刺激隐核虫Cryptocaryon irritans感染后,斜带石斑鱼鳃和皮肤中CD4表达量并没有显著变化(P<0.05),头肾和脾脏CD4表达量在感染5d后显著升高(P<0.05),第7d再次回落。说明刺激隐核虫感染可引起头肾和脾脏CD4+T细胞的增殖,预示头肾和脾脏CD4+T细胞在宿主对刺激隐核虫感染的抗力机制中可能发挥着重要作用。