摘要: 为了解山西及周边地区内脏利什曼病的病原体利什曼原虫(Leishmania spp.)的虫种类型及其基因多态性,使用首都医科大学附属北京友谊医院收治的13例来自山西及周边地区的内脏利什曼病患者的骨髓样本提取DNA,分别扩增其核糖体小亚基rRNA(small subunit ribosomal RNA,SSU rRNA)和核糖体DNA内转录间隔区Ⅰ(ITS-1)并应用其序列构建系统发育树确定患者感染原虫的虫种类型及其遗传关系。结果显示,13个临床样本SSU rRNA和ITS-1序列同源性分别为99.59%和99.93%。基于SSU rRNA构建的系统发育树显示13个患者感染的虫种与杜氏利什曼原虫L.donovani、婴儿利什曼原虫L.infantum和恰氏利什曼原虫L.chagasi聚为一支。基于ITS-1构建的系统发育树显示13例患者感染的利什曼原虫均属于婴儿利什曼原虫。SSU rRNA与ITS-1序列分类的结果一致,ITS-1在利什曼原虫虫种鉴定上较SSU rRNA分辨率高,可鉴定到亚种水平。13例山西及周边地区利什曼病患者感染原虫均为婴儿利什曼原虫L.infantum,感染虫株间同源性较高。

摘要: 通过基因打靶构建基因缺失株是利什曼原虫分子水平研究的有效方法,而筛选特定的转化体是研究成功的第1步。筛选转化体常用抗生素筛选法。本文通过观察潮霉素和嘌呤霉素不同质量浓度对杜氏利什曼原虫四川分离株的生长抑制情况,确定了在抗性基因转化的阳性克隆筛选中,潮霉素及嘌呤霉素的适宜筛选浓度分别为32和10μg/mL。本实验的结果为下一步筛选杜氏利什曼原虫基因缺失株提供了可靠的实验依据。

摘要: 目的 通过动物攻毒实验观察荒漠型杜氏利什曼原虫虫株在动物体内外的致病力，探索保持该虫株致病力的保存方法。方法 将从rK39抗体阳性灰仓鼠脾脏中分离获得的荒漠型杜氏利什曼原虫虫株分别在体外培养基中传代培养至7 d、30 d、36 d、44 d、60 d、90 d和150 d后，按2.6×105条/只剂量腹腔接种至草原兔尾鼠，接种后60 d计算动物的脾脏系数、虫株感染率和抗体阳性率。进一步将荒漠型杜氏利什曼原虫虫株分别接种灰仓鼠和草原兔尾鼠进行传代保种，比较两种动物感染该虫株后的存活时间和致病力变化。结果 体外培养7～150 d的荒漠型杜氏利什曼原虫虫株接种后，草原兔尾鼠的脾脏系数由7 d的1.0%上升至30 d的2.2%，达到正常脾脏系数（0.15%）的10倍以上，而60 d的脾脏系数虽有下降，但仍然达正常值的3倍；虫株感染率和抗体阳性率由7 d的80%逐步下降至60 d的0%;90 d时的各项观测指标与对照组相比无明显差异，均在正常值范围内。传代感染虫株后，草原兔尾鼠的存活时间为1～13个月，感染的半数个体于接种后4个月内死亡；而灰仓鼠的存活时间为5～31个月，感染的半数个体于接种后13.7个月内死亡；两种动物的平均死亡时间差异显著（t=0.000 1,P<0.001），脾脏系数差异无统计学意义（t=0.990,P>0.05）。该虫株在两种动物体内的致病力一致，且在动物体内连续传代4年仍然具有致病力。结论 荒漠型杜氏利什曼原虫虫株随体外培养时间延长，其致病力逐步降低，90 d时对草原兔尾鼠已无致病力，说明培养基传代培养方法不能保持该虫株对动物的致病力。动物体内传代接种才可以保持该虫株对动物的致病力。