摘要: 唾液腺激肽是埃及伊蚊唾液中的舒血管物质 ,不仅在蚊虫吸血过程中有重要作用 ,还可能具有调节宿主细胞免疫的功能。本研究用PCR方法从基因组DNA扩增出唾液腺激肽的基因并进行了克隆测序 ,发现与报道的埃及伊蚊相应基因序列有几个碱基的差异 ,同源性 97 8% ,但成熟肽部分序列未发现差异 ,这一部分基因序列人工合成克隆入硫氧还蛋白融合表达载体进行了融合表达 ,为进一步的研究打下基础

摘要: 抗血小板凝集因子Apyrase是吸血昆虫唾液的重要功能因子 ,能水解被吸血宿主血液中血小板释放的ATP、ADP而抑制血小板凝集 ,以利吸血过程的顺利进行。本研究针对我国的白纹伊蚊 ,用兼并引物PCR法扩增了抗血小板凝集因子Apyrase的基因片断 ,并克隆入T载体进行了测序 ,经Clastal比较发现与埃及伊蚊相应序列有很高的同源性 ,为进一步的研究打下基础。

摘要: 目的 :构建白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株 4龄幼虫cDNA文库。方法 :抽提、纯化白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株 4龄幼虫总RNA ,进行反转录合成第 1链cDNA ;用Clontech公司SMARTTM cDNA文库构建试剂盒进行长距离PCR ,合成全长双链cDNA ;PCR产物经蛋白酶K消化、提纯后 ,进行SfiI酶切 ;用ChromaSpin 40 0柱将酶切产物进行分级分离 ,然后经 1 1%琼脂糖凝胶电泳鉴定 ,回收 40 0bp以上的组分 ,并与λTriplEx2载体连接 ;连接产物经体外蛋白包装 ,产生未扩增文库 ;检测未扩增文库滴度和重组效率后 ,进行文库的扩增 ,并测定扩增文库的滴度 ;随机挑取 9个噬菌体 ,用载体克隆位点两端的引物进行PCR扩增 ,以检测所构建的cDNA文库的质量。结果 :经检测 ,未扩增文库滴度达 2 0× 10 7pfu mL ,重组效率在 10 -4 稀释度时每块平板约 2 10～ 2 5 5个噬菌斑中均未发现任何蓝色噬斑 ,扩增文库滴度达 1 75× 10 9pfu mL ;用载体克隆位点两端的引物进行PCR鉴定 ,结果显示 :所选 9个噬菌体中均含有重组的cDNA ,并且均在 5 0 0bp以上 ,其中 1kb以上的有 2个、 70 0bp的有 5个、 5 0 0bp的有 2个。结论 :已成功地获得一高质量的白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株 4龄幼虫cDNA文库。

摘要: 白纹伊蚊对高效氯氰菊酯有较快的抗性发展速度 ,抗药性倍数随选育世代的增加呈直线上升 ,经 13代选育 ,抗药性达 2 5 8倍。该蚊对高效氯氰菊酯的抗性不受亲本性别影响 ,是常染色体、多因子遗传。正交和反交的显性度分别为 0 5 0 45和 0 5 2 90 ,表明主要抗药性基因为不完全显性。

摘要: 目的 :获得白纹伊蚊 CYP6基因家族中新成员的基因片段。方法 :根据家蝇 CYP6 A1、 CYP6 D1以及致倦库蚊 CYP6 E1同源区氨基酸序列 ,设计 1对简并引物 ,分别以白纹伊蚊敏感品系和抗性品系基因组 DNA为模板进行 PCR,产物经 T- A克隆转化至 JM10 9大肠杆菌中 ,经筛选后测序 ,获得与设计的细胞色素 P4 50基因片段大小相符合的 5个基因片段 ,并将推导的氨基酸序列进行同源性分析。结果 :在白纹伊蚊敏感品系中获得了 2个基因片段 ( A EDG- S1,AEDG- S2 ) ,核苷酸序列长度分别为 2 4 0 bp和 2 36 bp;在白纹伊蚊溴氰菊酯抗性品系中获得了 3个基因片段 ( A EDG- R2 ,A EDG- R3,AEDG- R4 ) ,核苷酸序列长度分别为 2 36 bp、 2 36 bp和 2 39bp。所得序列与昆虫 CYP6家族的同源性在 2 3.1%～ 53.8%之间 ,与 CYP3家族的同源性在 2 5.6 %～4 3.9%之间 ,而与 CYP4家族同源性较低 ,为 13.9%～ 2 4 .4 %。结论 :所得 5个序列为 CYP6家族中 5个新成员的基因片段。