摘要: 采用限制性内切酶消化、琼脂糖凝胶电泳及分子杂交技术对８株中国伊氏锥虫动基体ＤＮＡ（ｋＤＮＡ）微环进行了比较研究。结果显示，我国伊氏锥虫株之间的ｋＤＮＡ微环序列具有较高的同源性，仅限制酶 ＡｌｕＩ，ＨｉｎｆＩ及 ＭｂｏＩ的酶解结果显示少数虫株的 ｋＤＮＡ微环存在异源序列。这种异源性可以作为伊氏锥虫种内分类的遗传学标志。

摘要: 根据报道的布氏锥虫(Trypanosoma brucei)微管结合蛋白p15(Tb-MAPp15)基因及其3′非翻译区保守序列设计引物,采用PCR法从伊氏锥虫云南水牛株(Trypanosoma evansi stock YNB)基因组DNA中克隆得到伊氏锥虫微管结合蛋白p15(Te-MAP p15)基因。克隆片段长273bp,编码90个氨基酸,预测分子量9.0kDa。经同源性比较,所得基因与Tb-MAP p15基因同源率达到94%。抗原性分析Te-MAP p15基因表达的氨基酸序列比T.brucei微管结合蛋白p15多5个,均参与组成其中1个抗原决定簇,并且此抗原决定簇序列形成在蛋白中常作为识别位点的α螺旋。将该基因亚克隆到pGEX-6P-1原核表达载体,转化大肠杆菌E.coli RS21宿主菌,经IPTG诱导,可成功表达。重组融合蛋白大小为35kDa,与预期大小一致,经SDS-PAGE和Western-blot鉴定为重组伊氏锥虫微管结合p15蛋白。

摘要: 为建立伊氏锥虫动基体DNA(KinetoplastDNA,kDNA)的PCR扩增技术,血液直接PCR法检测伊氏锥虫的感染,本文以伊氏锥虫kDNA片段为靶扩增DNA设计引物,确定最适PCR反应条件,建立kDNA片段的PCR扩增技术,应用直接扩增缓冲液(Ampdirect)从感染小鼠的滤纸血标本直接PCR检测伊氏锥虫。结果发现,PCR扩增伊氏锥虫kDNA片段分子量为364bp,能检测的最小DNA量是0·06pg,与布氏锥虫、活动锥虫没有交叉反应。应用直接扩增缓冲液不需进行样本的DNA抽提,直接PCR能检测感染小鼠的早期滤纸血样本,敏感性高于镜检法。本实验建立的直接PCR法检测伊氏锥虫具有较高的敏感性和特异性,方法快捷,可进一步应用于伊氏锥虫病的早期诊断以及现场调查。

摘要: 将编号为01,02,03,04,05的5个伊氏锥虫克隆群体以107条/只的剂量经耳静脉分别接种至1只新西兰大白兔体内,免疫荧光试验检测抗体滴度达到最高后,开始耳静脉采血提取抗血清。之后每隔2天提取一次抗血清,每只共提取10次,5只共50份血清等量(各占1/50)混合,称为抗活体锥虫血清“抗体库B”;此外取BeTat1·1,BeTat1·2……BeTat1·19,BeTat1·20共计20个抗原变异体以107条/只的剂量经耳静脉分别接种至1只新西兰大白兔体内,免疫荧光试验检测抗体滴度达到最高后,一次心脏采血,分离血清,20只共20份血清等量(各占1/20)混合,称为抗活体锥虫血清“抗体库A”;取编号为01的伊氏锥虫克隆群体以100条/只的剂量腹腔注射分别接种小鼠和大鼠,镜检见虫后使用抗活体锥虫血清“抗体库B”和抗活体锥虫血清“抗体库A”分别进行治疗。结果显示“抗体库B”治疗组的小鼠保护率为93·75%,大鼠的保护率达到了100%,“抗体库A”的治疗效果则不明显。

摘要: 为探讨筛选安锥赛治疗伊氏锥虫病有效剂量的快速方法 ,采用生长繁殖抑制法测定伊氏锥虫XJCA、HBM、ZJB1、JSB1、JSB2和ZJB2分离株对安锥赛的敏感性 ,结果它们的IC50 依次是 0 0 0 15 11、 0 0 0 8436、0 0 15 5 0、 0 0 16 2、 0 0 5 90 6和 0 0 82 6 0 μg mL。采用小白鼠体内试验 ,测定这 6株伊氏锥虫的CD10 0 ,每个分离株伊氏锥虫有安锥赛 3个剂量组和不治疗对照组 ,每个治疗组 10只小白鼠 ,对照组 5只小白鼠 ,每只小白鼠经腹腔接种 1 0× 10 6条锥虫 ,以给药剂量 ,将XJCA株分为 3 5mg kg组、 5 0mg kg组和 7 1mg kg组 ,HBM株分为 3 5mg kg组、 5 0mg kg组和 7 1mg kg组 ,ZJB1分为 5 0mg kg组、 7 0mg kg组和 9 0mg kg组 ,JSB1株分为 5 0mg kg组、 7 1mg kg组和 10 1mg kg组 ,JSB2株分为 7 0mg kg组、 9 0mg kg组和 11 0mg kg组 ,ZJB2株分为 9 0mg kg组、 11 0mg kg组和 13 0mg kg组 ,结果这 6个伊氏锥虫分离株的CD10 0 依次为3 5mg kg、 5 0mg kg、 7 0mg kg、 7 1mg kg、 11 0mg kg和 13 0mg kg。它们的IC50 与CD10 0 的相关系数经计算和检验分析 ,IC50 与CD10 0 之间相关系数为 0 2 2 2 ,这表明它们呈曲线性正相关 ,以IC50 与CD10 0 作出它们的相关“曲线”。