摘要: 为研究亚洲玉米螟Ostrinia furnacalis(Guenée)幼虫体内酚氧化酶原激活蛋白酶(prophenoloxidase activating proteinase,PAP)表达调控的分子机理,本研究根据不同昆虫酚氧化酶原激活蛋白酶基因序列的保守区域,设计合成简并引物,采用RT-PCR技术从亚洲玉米螟5龄幼虫中扩增出PAP的一段cDNA片段,大小为509bp,编码169个氨基酸,预测分子量为18.7kD,理论等电点(pI值)为5.1。该基因序列中含有丝氨酸蛋白酶样结构域中保守的催化三联体,不含发夹结构域。BlastP分析结果表明:该片段的氨基酸序列与烟草天蛾Manduca sextaPAP-3和冈比亚按蚊Anopheles gambiae发夹型蛋白B1的氨基酸序列一致性最高,为47%;与烟草天蛾PAP-2、家蚕BombyxmoriPPAE、斜纹夜蛾Spodoptera lituraPPAE-3、蓖麻蚕Samia cynthia riciniPAP和黑腹果蝇Drosophila melanogaster丝氨酸蛋白酶7的氨基酸序列的一致性分别为45%,45%,44%,43%和41%。构建系统发育树,对其进化关系进行了初步分析,结果显示:亚洲玉米螟PAP与烟草天蛾PAP-3和斜纹夜蛾PPAE-3的亲缘关系较近,与黑腹果蝇丝氨酸蛋白酶7和冈比亚按蚊发夹型蛋白B1的亲缘关系较远。这些结果说明克隆得到的cDNA片段为亚洲玉米螟幼虫PAP基因靠近羧基端的部分序列。

摘要: 为了研究Interruptin B的杀虫活性,初步探讨其杀虫作用机理,本研究采用叶碟法和叶片浸渍法测定了Interruptin B对小菜蛾Plutella xylostella和亚洲玉米螟Ostrinia furnacalis3龄幼虫的拒食活性和毒杀活性;采用注射法和血球计数法研究对斜纹夜蛾Spodoptera litura幼虫血细胞数的影响;采用四甲基偶氮唑盐[3-(4,5-dimethylthiazole-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide,MTT]法测定对斜纹夜蛾卵巢细胞(SL细胞)的增殖抑制作用;采用倒置显微镜观察对SL细胞形态、密度和贴壁率的影响。结果显示:处理后48h,Interruptin B对亚洲玉米螟和小菜蛾3龄幼虫的拒食中浓度(AFC50)分别为108.56和143.88μg/mL,致死中浓度(LC50)分别为346.23和194.32g/mL;处理后24h和48h,对SL细胞的抑制中浓度(IC50)分别为13.51和4.11g/mL。Interruptin B处理SL细胞后12-48h,细胞密度随时间的延长而下降,与对照差异显著(P<0.05);处理后3,6,12,24和48h,SL细胞变形率分别为28.18%,83.90%,85.18%,93.93%和100%,细胞贴壁率分别为96.59%,89.90%,83.18%,5.06%和1.09%,处理后6-48h,SL细胞变形率和贴壁率与对照差异显著(P<0.05)。Interruptin B对小菜蛾和亚洲玉米螟3龄幼虫具有良好的拒食和毒杀活性,能显著降低斜纹蛾幼虫血细胞数量,对SL细胞具有良好的增殖抑制作用,可显著降低SL细胞生长密度,改变细胞形态,降低贴壁率,表明该化合物可通过影响昆虫细胞活力毒杀活体昆虫。

摘要: 本文通过对中国亚洲玉米螟Ostrinia furnacalis(Guenée)17个地理种群的线粒体COⅡ基因进行序列分析,对中国亚洲玉米螟种群间的遗传分化程度和基因流水平进行了初步研究。在获得的413条序列样本中共发现了34个变异位点、35种单倍型。总体单倍型多样性指数Hd为0.811,种群内单倍型多样度在0.4240.862范围内。17个种群间的平均基因流(Nm)为2.02。总群体的固定系数Fst为0.234。AMOVA分子方差分析结果表明中国玉米螟的遗传分化主要来自种群内部(76.45%)。各种群的TajimasD值中性检验符合中性突变,说明中国亚洲玉米螟在历史上没有出现群体扩张,群体大小稳定。各地理种群的遗传距离与地理距离间不具有显著的相关性。各地理种群中的单倍型在系统发生树上散布在不同的分布群中,缺乏明显的地理分布格局。

摘要: 利用透射显微镜(TEM)观察亚洲玉米螟Ostrinia furnacalis(Guene)幼虫取食了表达Cry1Ab杀虫蛋白的转Bt基因玉米心叶组织后中肠的组织病理变化,以探讨转Bt基因玉米对亚洲玉米螟的致病机理,为其合理、安全和持续利用提供理论依据。结果表明:亚洲玉米螟取食Bt玉米后中肠细胞及其细胞器发生了明显的病变。取食Bt玉米12h后中肠细胞开始病变,首先微绒毛脱落、内质网开始肿胀,24h后内质网肿胀、增多,杯状细胞杯腔增大,48h后微绒毛大量脱落,细胞开始空泡化,随着取食时间的增加,细胞空泡化程度加剧,在感染前期细胞间的病变程度差异较大。微绒毛脱落、内质网肿胀断裂是在多数取食Bt玉米的亚洲玉米螟中肠细胞发生的普遍病变。由此表明,人工修饰的Cry1Ab基因导入到玉米染色体组中所表达的杀虫蛋白可使玉米螟幼虫中肠细胞发生病变,最终导致其死亡。

摘要: 本文报道印楝素对亚洲玉米螟Ostrinia furnacalis Guene幼虫生长发育的抑制作用和引起幼虫各器官的病变症状。用含20ppm印楝素的人工饲料饲喂亚洲玉米螟3—4龄幼虫2天,然后换入正常饲料,可使幼虫期显著延长,最后不能化蛹而死亡。印楝素对幼虫的作用是缓慢的,虫体受药后还可发育一个龄期。处理幼虫的行为失常,取食动作逐渐消失,主要靠消耗体内的水分和脂肪来维持生命。幼虫的胸足变黑,胸部出现褐色斑,这些部位的表皮分层不正常,真皮细胞坏死或自溶。处理幼虫的大脑萎缩,生殖器官和前胸腺肿大,前胸腺细胞膜厚而松散,血淋巴中β-蜕皮酮含量显著降低。从整个中毒症状来看,印楝素可能作用于亚洲玉米螟幼虫的神经和内分泌系统,从而逐渐引起各器官的病变。