摘要: 为探讨二化螟Chilo suppressalis(Walker)肠道微生物多样性与抗药性的关系,本研究采用基于16S rDNA的变性梯度凝胶电泳(DGGE)和16S rDNA文库序列分析方法,检测和分析了二化螟4个抗药性水平不同的种群幼虫中肠细菌群落多样性。生测结果表明,以二化螟黑龙江种群(HIJ种群)作为相对敏感品系,连云港种群(LYG种群)对杀虫单、毒死蜱、三唑磷的抗性为低抗至中抗水平,瑞安种群(RA种群)和诸暨种群(ZJ种群)的抗性为中抗至极高抗水平,这3个种群对阿维菌素均为敏感水平。16S rDNA文库序列分析表明,PCR扩增得到的16S rDNA基因代表了二化螟幼虫中肠内21种细菌系统发育型,其中大多数属于链球菌属Streptococcus。在不同抗药性水平二化螟种群中,幼虫中肠微生物群落除ZJ种群的Lactococcus garvieae,L.lactissubsplactis和Ochrobactrum anthropic等3种菌较丰富外,其余均以肠球菌属Enterococcus为主。DGGE图谱显示,HIJ种群条带较为单一,LYG种群条带最为丰富,ZJ种群与RA种群条带丰富度相似。4个种群均出现Enterococcus faecium,E.hirae和Arthrobacter sp.等细菌,且以肠球菌属Enterococcus为主。结果显示了不同抗药性水平的二化螟种群中肠细菌群落的丰富度存在差异,推测可能与二化螟不同抗药性差异有关。

摘要: 气味结合蛋白(odorant binding proteins,OBPs)在昆虫对寄主气味的感受中起重要作用,但有关Minus-C OBP及其功能的报道很少。本研究通过基因组数据分析并利用RACE技术,克隆和鉴定了二化螟Chilo suppressalis(Walker)的一个Minus-C OBP基因,命名为CsupOBP1(GenBank登录号:KC492498)。CsupOBP1基因的开放阅读框长423 bp,编码141个氨基酸,其中N端的18个氨基酸为预测的信号肽序列,成熟蛋白序列中具有4个保守的半胱氨酸位点。实时定量PCR分析显示,该基因在幼虫头部及成虫雌雄足、翅和雄性触角等化感组织中高表达,其中在雄虫触角内的表达量显著高于雌虫触角。利用荧光竞争结合实验对CsupOBP1重组蛋白与38种化合物的结合特性的测定表明,重组CsupOBP1与β-紫罗兰酮的结合能力最强(Ki=9.53μmol/L)。触角电位测定表明,二化螟成虫可对β-紫罗兰酮产生显著的触角电生理反应,但雄虫反应明显强于雌虫,与结合试验及雄虫触角中CsupOBP1的表达量显著高于雌虫触角的测定结果相一致。鉴于β-紫罗兰酮是水稻等植物中普遍存在的一种芳香气味组分,推测CsupOBP1可能通过对该气味的结合和运输,从而在二化螟对寄主植物的嗅觉定向中起作用。

摘要: 为了阐明二化螟Chilo supprressalis滞育幼虫的分子特征及滞育期间保护酶活性的变化规律,本研究应用Trizol法、总量DNA提取法和蛋白定量试剂盒,测定了在长光周期16L∶8D和25℃下发育的非滞育老熟幼虫、在短光周期12L∶12D和25℃下诱导滞育51d的幼虫(称为滞育0个月)、滞育1,2和3个月幼虫的核酸含量和总蛋白含量;同时应用试剂盒测定了老熟幼虫、滞育0,1和2个月的二化螟幼虫5种保护酶(POD,CAT,SOD,LDH和ATP酶)的活性。结果表明:滞育幼虫的总RNA含量显著低于非滞育的老熟幼虫(P<0.05),而滞育1,2和3个月的幼虫之间没有显著差异(P≥0.05)。老熟幼虫的总DNA含量显著高于滞育幼虫(P<0.05)。老熟幼虫的RNA/DNA比值较低,滞育幼虫的RNA/DNA比值较高,RNA/DNA比值随着滞育时间的推移呈现出先上升后下降的趋势。滞育期大于1个月的幼虫中蛋白含量均显著高于非滞育的老熟幼虫(P<0.05),而滞育1,2和3个月的幼虫之间没有显著差异(P≥0.05)。二化螟幼虫体内5种保护酶活性随发育阶段不同而存在差异。滞育幼虫中POD,CAT和SOD的活性随滞育时间延长而逐渐增强,滞育2个月幼虫中的活性最高,而非滞育老熟幼虫中的活性最低;LDH和ATP酶的活性则相反,非滞育老熟幼虫中的活性最高,滞育2个月幼虫中的活性最低。这些结果说明,总RNA和DNA含量降低、RNA/DNA比值先升后降、总蛋白含量升高以及保护酶活性的变化是二化螟幼虫滞育过程中的主要生理特征。

摘要: 二化螟抗性和敏感品系分别采自浙江和安徽太湖。毒力测定结果表明 ,抗性品系对杀虫单和甲胺磷分别产生了 37 7和 5 2 7倍的抗性。代谢酶活性的测定结果显示 ,抗性品系多功能氧化酶氧脱甲基活性、氮脱甲基活性分别是敏感品系的3 3和 1 34倍 ,而羧酸酯酶活性和谷胱甘肽转移酶活性两个品系之间没有显著差异。说明多功能氧化酶活性提高可能是二化螟对甲胺磷、杀虫单抗性的一个重要机制。为了研究二化螟可能存在的对沙蚕毒素杀虫剂靶标不敏感机制 ,采用RT -PCR等分子生物学技术 ,分别对 5个敏感个体和 4抗性个体中克隆杀虫单作用的靶标烟碱型乙酰胆碱受体α1亚基 (nAChRαsubunit 1)cDNA序列进行了分子克隆。序列比较发现一共存在 33个单核苷酸的多态性 ,其中 14个引起了编码氨基酸的改变。但是没有发现与抗性有关的特有的碱基突变。

摘要: 利用Y 型嗅觉仪研究了二化螟绒茧蜂Cotesiachilonis对寄主植物 (水稻或茭白 )、二化螟Chilosuppressalis幼虫、虫粪及虫害苗挥发物的行为反应。健康植株、二化螟幼虫和虫粪的挥发物对二化螟绒茧蜂具有显著引诱作用。在虫害苗与健康苗挥发物之间 ,二化螟绒茧蜂显著地偏好虫害苗 ,但当去除虫害苗中的幼虫和虫粪后 ,寄生蜂对去虫苗与机械损伤苗的选择无显著差异 ;在虫害苗与有虫健康苗之间 ,寄生蜂显著趋向虫害苗 ,表明虫害苗本身释放的挥发物对二化螟绒茧蜂引诱作用与机械损伤苗无显著差异 ,但与二化螟幼虫或虫粪挥发物之间可能具有协同增效作用。水稻苗经机械损伤或损伤后以二化螟幼虫唾液处理 ,其挥发物对二化螟绒茧蜂的引诱作用无显著改变。二化螟绒茧蜂对不同为害程度水稻挥发物的选择无显著差异。二化螟绒茧蜂对两种寄主植物的健康苗、虫害苗、取食两种植物的幼虫及虫粪的挥发物的选择无显著差异。结果表明 ,二化螟绒茧蜂栖境定位和寄主选择过程中所利用的挥发物主要来自寄主植物、二化螟幼虫和虫粪以及虫害苗与幼虫和虫粪的协同作用。