摘要: 【目的】推进中药九香虫开发与利用，探究九香虫多糖对人乳腺癌HCC1937细胞的作用效果。【方法】采用单因素实验和正交试验探究水提醇沉法提取九香虫多糖的最优条件，基于九香虫多糖提取率来确定最佳液料比、提取温度、提取时间和提取次数；CCK-8法检测0, 2, 4, 6, 8和10 mg/mL九香虫多糖作用后24和48 h时对人乳腺癌HCC1937细胞增殖的影响；0, 4和8 mg/mL九香虫多糖处理HCC1937细胞，0, 24和48 h时倒置显微镜下观察HCC1937细胞形态并于24和48 h时利用Hoechst 33258染色检测HCC1937细胞凋亡，24 h时利用流式细胞术检测HCC1937细胞的细胞周期并利用Western blot检测凋亡相关蛋白的表达。【结果】正交试验结果表明，九香虫多糖的最佳提取条件为：液料比40 mL/g、提取温度90 ℃、提取时间3 h和提取次数3次，在上述条件下九香虫多糖提取率最高，为5.067%±0.071%。4, 6, 8和10 mg/mL九香虫多糖能够显著抑制HCC1937细胞增殖；8 mg/mL九香虫多糖阻滞HCC1937细胞的细胞周期于S期；4和8 mg/mL九香虫多糖促进HCC1937细胞凋亡，上调促凋亡蛋白CASPASE-3, CASPASE-8和BAX表达，下调抑凋亡蛋白BCL-2表达。【结论】采用水提醇沉法在最优提取条件下提取九香虫多糖的最高提取率为5.067%±0.071%，最优提取条件为：液料比40 mL/g、提取温度90℃、提取时间3 h和提取次数3次；九香虫多糖具有体外抑制人乳腺癌HCC1937细胞的活性，且可能是通过死亡受体通路和线粒通路引发细胞凋亡。

摘要: 【目的】释放防御分泌物在生物的进化、天敌防御、信息传递及生长发育和繁殖过程中具有重要作用。本文旨在探究网络药理学方法用于生物防御分泌物研究的可行性。【方法】以九香虫Aspongopus chinensisDalls为例，在已知其防御分泌物成分的基础上，运用网络药理学和生物信息学方法分析生物分泌物的作用。【结果】九香虫防御分泌物成分复杂，且5/12的成分未在数据库中预测到靶点，相关研究缺乏；生物信息分析结果表明，防御分泌物的作用靶点分布广泛，在代谢、信息传递等生物进程及酶、受体功能活性等分子功能上扮演了重要角色，且可能与化学致癌、信息传递及生殖细胞成熟等多种通路密切相关。【结论】九香虫防御分泌物成分复杂，且具有信息传递和机体代谢等功能活性。

摘要: 【目的】保幼激素环氧水解酶(Juvenile hormone epoxide hydrolase,JHEH)是昆虫体内保幼激素(Juvenile hormone,JH)的主要降解酶。本文旨在分析九香虫Aspongopus chinensis Dallas保幼激素环氧水解酶基因序列(AcJHEH)信息,探索其在九香虫生长发育过程中的作用。【方法】以九香虫成虫的cDNA为模板,采用RT-PCR技术克隆获得AcJHEH基因序列,并利用生物信息学软件对其编码蛋白的理化特性、结构特征和系统进化进行分析;采用qRT-PCR技术检测并分析九香虫不同龄期和不同组织中AcJHEH的相对表达量。【结果】成功获得了AcJHEH的完整开放阅读框ORF序列,全长均为1 363 bp,共编码453个氨基酸,预测分子量为51.74 ku,等电点(pI)为7.66,分子蛋白式C2414H3683N581O653S14,含有N-端跨膜基序XWG、催化三联体、保守基序HGWP和2个酪氨酸,属于环氧水解酶家族。系统进化树分析表明,AcJHEH与茶翅蝽Halyomorphahalys的JHEH聚为一支,再与同为半翅目的臭虫Cimex lectulariu和绿盲蝽Apolyguslucorum的JHEH聚为一类。荧光定量PCR结果显示,AcJHEH在九香虫不同发育阶段和各组织中均有表达,且脂肪中的表达量极显著高于其它组织(P<0.001);滞育九香虫成虫表达量最高,其次为4-5龄若虫都极显著高于其它发育阶段(P<0.001)。【结论】九香虫JHEH属于环氧水解酶家族,确定为保幼激素环氧水解酶。依据qPCR结果推测AcJHEH通过改变九香虫体内保幼激素浓度来影响九香虫4-5龄若虫蜕皮发育、成虫生殖系统发育和滞育等。

摘要: 【目的】研究九香虫Aspongopus chinensis Dallas滞育期体内的脂肪、糖类(总糖、糖原、海藻糖)、蛋白质含量的变化,探索体内营养物质变化与九香虫滞育的关系。【方法】本研究利用索氏提取法、蒽酮比色法和BCA蛋白定量试剂盒分别测定了九香虫滞育期(10月-次年4月)和滞育解除后(次年5月)其体内的脂肪、糖类和蛋白质含量变化。【结果】九香虫滞育期脂肪含量随着时间推移逐渐降低,到滞育后期(4月)脂肪含量最低为19.51%,与滞育初期(10月)的40.55%相比存在显著性差异(P<0.05);糖类在滞育初期(10月)开始积累,直至11月后不断减少至4月,滞育解除后(5月)糖类的含量又显著增高(P<0.05);蛋白质含量从滞育初期(10月)开始缓慢增加,直至3月开始下降,滞育解除后蛋白质含量显著低于滞育期(P<0.05)。【结论】九香虫滞育期体内脂肪、糖类和蛋白都发生了不同程度的变化。脂肪含量降低,糖类的含量先升后降,蛋白质含量先增后减是九香虫滞育过程中主要的生理特征。

摘要: 【目的】从药用昆虫九香虫Coridius chinensis中分离纯化抗菌肽,为进一步开发九香虫抗菌肽资源及深入挖掘九香虫的药用功能奠定基础。【方法】用大肠杆菌Escherichia coli和金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus混合物作诱导源刺激九香虫产生抗菌肽,对血淋巴进行提取、凝胶过滤层析、固相萃取及反相色谱纯化,活性组分经质谱测定。对分离得到的这种抗菌肽进行人工合成,并进行抗菌活性检测。【结果】本研究获得一种九香虫抗菌肽Cc AMP1,由17个氨基酸残基组成,分子量为1 997.37 u,带1个正电荷,表面有5个疏水氨基酸。对人工合成的Cc AMP1进行抗菌活性检测表明,该抗菌肽与九香虫血淋巴一样对金黄色葡萄球菌等革兰氏阳性菌和大肠杆菌等革兰氏阴性菌都有较好的抗菌活性,且对革兰氏阴性菌的抗菌活性更强。【结论】从九香虫中分离得到具有较强抗菌活性的阳离子抗菌肽Cc AMP1,有较大的开发利用价值。