摘要: 【目的】本研究旨在阐明取食行为对丽蝇蛹集金小蜂Nasonia vitripennis(Walker)雌雄虫体内可培养真菌群落结构的影响,对其体内可培养真菌进行多样性研究。【方法】采用不同浓度、不同培养基通过分离培养法研究丽蝇蛹集金小蜂体内真菌,将培养所得真菌采用形态和分子方法(ITS基因序列)进行鉴定。【结果】取食前后丽蝇蛹集金小蜂雌、雄虫体内共分离得到49种真菌,隶属子囊菌门,盘菌亚门的座囊菌纲、散囊菌纲、锤舌菌纲、子囊菌纲,共10个属,其中以链格孢属(Alternaria)、枝孢属(Clacdosporium)、青霉属(Penicillium)为优势属。【结论】丽蝇蛹集金小蜂体内可培养真菌物种数目,雄虫多于雌虫,取食后多于取食前。本研究结果说明食物、性别是丽蝇蛹集金小蜂体内可培养真菌群落结构产生差异的重要因素。

摘要: 【目的】明确内共生菌Wolbachia对丽蝇蛹集金小蜂Nasonia vitripennis繁殖适合度和成蜂寿命的影响。【方法】通过给自然感染Wolbachia的丽蝇蛹集金小蜂成蜂喂食不同浓度的利福平来消除其体内的Wolbachia,然后进行10个世代的连续饲养,探究不同浓度利福平对丽蝇蛹集金小蜂体内Wolbachia的去除效果和去除Wolbachia后对丽蝇蛹集金小蜂繁殖力、性比(雌蜂占子代数量的比值)和成蜂寿命的影响。【结果】低浓度利福平(0.10.5 mg/m L)对丽蝇蛹集金小蜂的毒害作用较小,而高浓度利福平(0.710.0 mg/m L)对丽蝇蛹集金小蜂的毒害作用较大,但二者均能去除丽蝇蛹集金小蜂体内的Wolbachia;去除Wolbachia后丽蝇蛹集金小蜂的出蜂量显著下降(P<0.01),子代中性比显著下降(P<0.01),但寿命无明显差异。【结论】不同浓度利福平均能去除丽蝇蛹集金小蜂体内Wolbachia,但效果不一致;Wolbachia对丽蝇蛹集金小蜂的出蜂量和子代性比均有显著影响,对成蜂寿命无显著影响。

摘要: Pacifastin蛋白酶抑制剂在昆虫免疫与发育中起着重要作用。为了明确其在寄生蜂中的相关功能,本研究分别克隆获得编码丽蝇蛹集金小蜂Pacifastin蛋白酶抑制剂开放阅读框的cDNA序列nvpp-1和nvpp-2,序列长度分别为723和888 bp,分别编码240和295个氨基酸残基。预测结果表明,nvpp-1和nvpp-2推导氨基酸序列N端均含一个长度为17个氨基酸残基的信号肽序列。序列分析和进化树构建结果表明,NVPP-1和NVPP-2分别含有5个和4个典型的Pacifastin保守结构域,并与疑黑瘤姬蜂Pimpla hypochondriaca毒液蛋白CVP4聚为一类。实时荧光定量RT-PCR结果表明,nvpp-1和nvpp-2于该蜂雌蜂各组织中均发生转录,且在胸、腹部残体(解剖后腹部剩余部分)和毒器官中的转录水平较高;于毒器官中,其在羽化初期(0和1 d)转录水平较高,其转录水平显著降低。Western blot结果表明,NVPP-1和NVPP-2均只在毒液中被大量检出,在其他待测组织中均未被检出,而刚羽化时(0 d)其在毒液中含量较低。利用pET-28a(+)载体分别对nvpp-1和nvpp-2进行了原核表达,并对重组表达产物进行纯化。分别测定重组NVPP-1和NVPP-2对4种不同丝氨酸蛋白酶(胰蛋白酶、糜蛋白酶、蛋白酶K和弹性蛋白酶)的抑制效果,结果表明,重组NVPP-1和NVPP-2分别能显著抑制糜蛋白酶和胰蛋白酶活性。同时还分别测定了两种重组蛋白对寄主家蝇蛹血淋巴自身的酚氧化酶活性及原酚氧化酶激活反应的影响,结果表明,重组蛋白对家蝇蛹血淋巴原酚氧化酶激活反应亦有抑制效果,但其均不能显著影响血淋巴自身的酚氧化酶活性。综上所述,丽蝇蛹集金小蜂毒液中含有Pacifastin蛋白酶抑制剂NVPP-1和NVPP-2,分别为糜蛋白酶抑制剂和胰蛋白酶抑制剂家族成员,均能显著影响寄主家蝇蛹血淋巴原酚氧化酶激活反应,从而削弱寄主体液免疫水平。本研究所获结果加深了我们对昆虫尤其是寄生蜂Pacifastin蛋白酶抑制剂作用的认识。

摘要: 活体微注射测定结果表明 ,将 0 5毒囊当量 (venomreservoirequivalent,VRE)的蝶蛹金小蜂毒液注射于其寄主菜粉蝶蛹体内 ,注射后 4 2 4h寄主浆血细胞和颗粒血细胞的延展、存活和对SephadexA 5 0微珠的包囊能力显著下降 ;以 0 0 0 2 0 0 2VRE μL的该蜂毒液处理其离体寄主血细胞均能产生同样的生理效应。该毒液抑制 90 %菜粉蝶蛹浆血细胞和颗粒血细胞延展的浓度各为 0 0 0 0 76VRE μL和 0 0 0 80 4VRE μL。可见 ,蝶蛹金小蜂毒液能显著抑制其寄主血细胞的延展和包囊作用 ,并导致血细胞的死亡。然而 ,同样条件下丽蝇蛹集金小蜂毒液对其非自然寄主菜粉蝶蛹的血细胞延展、存活和包囊作用则无任何效应。可见 ,寄生蜂毒液的生理作用具有明显的寄主特异性。

摘要: 为了探讨蛹期寄生蜂对寄主蛋白代谢的寄生生理效应,利用Bradford蛋白含量测定法、Western免疫印迹法及酶联免疫吸附检测法研究了棕尾别麻蝇Boettcherisca peregrina蛹被丽蝇蛹集金小蜂Nasonia vitripennis寄生后其脂肪体和血淋巴中可溶性蛋白及芳基蛋白组成与含量的变化。结果表明:寄生蛹脂肪体和血淋巴中可溶性蛋白的组成与未寄生相比基本无明显差异;不论寄生与否寄主蛹脂肪体和血淋巴中芳基蛋白亚基分子量均为80kDa,该亚基在脂肪体中未出现降解现象,而在血淋巴中仅于寄生后12h的寄主蛹中呈现2条分子量相近的Western免疫印迹带,说明其降解可能先于未寄生对照。就含量而言,寄生蛹脂肪体中可溶性蛋白含量除寄生后24h外均显著低于未寄生对照,芳基蛋白含量除寄生后48h外也均显著低于未寄生对照,其中寄生后12h的含量仅为未寄生的32.0%。寄生蛹血淋巴中可溶性蛋白含量多低于未寄生蛹,且寄生后2,12,24h的差异达显著水平;芳基蛋白的含量均有低于未寄生的趋势,其中寄生后12h的含量为未寄生的17.0%。综合认为,丽蝇蛹集金小蜂的寄生可导致寄主脂肪体和血淋巴中可溶性蛋白及芳基蛋白含量下降。