摘要: 【目的】中华蜜蜂囊状幼虫病毒（Chinese sacbrood virus,CSBV）和东方蜜蜂微孢子虫Nosema ceranae都是严重威胁蜜蜂健康的重要病原，本研究旨在探究2种病原顺序感染对中华蜜蜂Apiscerana cerana存活率、营养代谢和免疫的影响。【方法】设置中华蜜蜂取食正常食物、先喂食CSBV后喂食东方蜜蜂微孢子虫和先喂食东方蜜蜂微孢子虫后喂食CSBV3个处理，利用PCR检测中华蜜蜂在取食第2天和第4天后体内病原增殖情况；通过RT-qPCR检测中华蜜蜂感染病原后第2天和第4天后体内CSBV数量以及营养代谢基因（ilp1、ilp2、hexamerin70b和hexamerin70c）和免疫应答基因（toll、relish、jra、apidaecin、abaecin、defensin、hymenoptaecin和JAK）的表达情况。【结果】先喂食CSBV后喂食东方蜜蜂微孢子虫组的中华蜜蜂体内孢子量高于先喂食东方蜜蜂微孢子虫后喂食CSBV组，而先喂食CSBV后喂食东方蜜蜂微孢子虫组的中华蜜蜂体内CSBV拷贝数显著高于先喂食东方蜜蜂微孢子虫后喂食CSBV组。先喂食CSBV后喂食东方蜜蜂微孢子虫组的中华蜜蜂营养代谢基因ilp1、ilp2、hexamerin70c和hexamerin70b的表达水平随感染时间延长逐渐呈现下调，而先喂食东方蜜蜂微孢子虫后喂食CSBV组中显著上调。先喂食CSBV后喂食东方蜜蜂微孢子虫组中华蜜峰免疫基因toll和relish表达量呈现先增加后下降，而jra、JAK、apidaecin、abaecin、defensin和hymenoptaecin的表达量显著增加，而先喂食东方蜜蜂微孢子虫后喂食CSBV组中8个免疫基因的表达量均显著增加。【结论】在顺序感染过程中，东方蜜蜂微孢子虫的感染抑制CSBV的增殖，而CSBV的感染则有助于东方蜜蜂微孢子虫的增殖。先喂食CSBV比先喂食东方蜜蜂微孢子虫对中华蜜蜂营养和生长发育的影响更显著，且更易引起宿主的免疫防御，表明CSBV与东方蜜蜂微孢子虫顺序感染中蜂后引起的免疫应答及营养代谢更为复杂。

摘要: 【目的】本研究旨在明确中华蜜蜂Apis cerana cerana热休克蛋白70(Heat shock protein 70,HSP70)与中蜂囊状幼虫病毒(Chinese sacbrood virus,CSBV)的关系。【方法】首先根据NCBI上已公布的中华蜜蜂HSP70的全基因(NO.MH122655.1)序列,设计特异性引物,提取3日龄中华蜜蜂幼虫总RNA,通过RT-PCR方法获得HSP70基因,并通过生物信息学软件进行分析;其次将其克隆到原核表达载体pET-32a中,转化入大肠杆菌BL21(DE3)进行蛋白表达,并制备重组蛋白,将纯化的重组蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体;最后利用制备多克隆抗体作为一抗,通过Western-blot方法检测CSBV感染中华蜜蜂前后HSP70在幼虫体内的变化。【结果】成功获取中华蜜蜂HSP70蛋白的全基因,其核苷酸序列全长为1 833 bp,生物信息学分析后,发现其编码蛋白存在7个抗原表位。利用原核表达系统,成功获得大小约87 ku的重组蛋白HSP70,免疫小鼠后获得多克隆抗体,经Western-blot分析能与标签蛋白发生特异性反应;对感染CSBV前后蜜蜂体内HSP70蛋白检测发现感染后HSP70表达水平显著提高。【结论】通过原核表达系统,成功表达中华蜜蜂HSP70基因和HSP70多克隆抗体,并证实CSBV感染后影响中华蜜蜂体内HSP70蛋白表达量的改变,为深入研究HSP70功能提供了帮助。

摘要: 【目的】蜜蜂触角作为嗅觉器官在蜜蜂的采集、繁衍等方面发挥着极其重要的作用。本研究以中华蜜蜂Apisceranacerana(简称中蜂)采集蜂触角为材料,通过蛋白质全谱分析鉴定中蜂采集蜂触角所含蛋白质,为研究蜜蜂嗅觉感受机制奠定数据基础。【方法】使用LC-MS/MS对中蜂采集蜂触角总蛋白进行鉴定;利用OmicsBean软件对中蜂采集蜂触角中鉴定的所有表达蛋白质进行GO分析和KEGG分析;采用q RT-PCR方法对不同级型中蜂触角中的NPC2(Niemann-Pick proteins of type C2)基因的转录情况进行检测。【结果】LC-MS/MS鉴定结果显示,中蜂采集蜂触角中共鉴定到1231个蛋白,其中包括14种与嗅觉相关的蛋白;GO分析与KEGG分析显示,分子功能分类中,绑定分子功能类别和催化活性功能类别所占比例最多。参与碳代谢、氨基酸、三羧酸循环、脂代谢等代谢通路的蛋白有297个,参与到环境信息加工和发育的有43个,参与到遗传信息加工的有67个,参与到小分子结合的约12%;qRT-PCR检测结果显示,NPC2在雄蜂的触角内表达量最高。【结论】本研究所鉴定到的中蜂采集蜂触角蛋白质为触角的发育及其功能的发挥提供了物质基础与能量基础。此外,嗅觉相关蛋白的分析也为后续深入研究中蜂对气味物质的识别和转运机制提供了分子数据支撑。

摘要: 中蜂囊状幼虫病是中华蜜蜂Apis cerana cerana(简称中蜂)常见疾病,其发病可对蜂群造成毁灭性打击,给中蜂产业造成巨大损失。本文综述了其病症、致病因素及现有的防治方法,并根据相关中草药的生物活性,分析中草药防治中蜂囊状幼虫病的可行性和应用潜能,旨在为中草药有效成分防治中蜂囊状幼虫病的应用提供思路,为保护中蜂健康、防治中囊病的发生以及生产安全、无污染的中蜂产品具有重要意义。

摘要: 本实验用聚丙烯酰胺凝胶等电聚集电泳分析了意蜂和中蜂的酯酶同工酶。意蜂和中蜂的酶谱有明显的种间差别。意蜂的酶谱可分为四组区带:酯酶Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ。意蜂不同发育阶段的酶谱也有不同。酯酶Ⅳ的含量在蛹期有很大的变化。酯酶Ⅳ表现出多态现象,对多态现象的分析可推测种群的杂合程度。