摘要: 对患病中华鳖(Pelodiscus sinensis)进行病原分离、鉴定及药敏实验,从患病中华鳖皮肤、肝肾脾重要器官分离纯化病原菌,经理化特性测定及16S r RNA序列分析对其进行鉴定及人工感染试验,并利用K-B及二倍稀释法进行药敏特性分析。结果表明分离株J22是为中华鳖腐皮病病原,其对中华鳖的LD50为3.30×104 CFU/g。J22株理化特性与产吲哚金黄杆菌(Chryseobacterium indologenes)一致,16S r RNA序列与产吲哚金黄杆菌同源性为99%,综合判定J22株是产吲哚金黄杆菌。分离株对新霉素、庆大霉素及阿莫西林等12种抗生素高度敏感,对氟苯尼考及多西环素等抗生素耐药;二氧化氯、漂白粉及高铁酸钾对分离株消毒效果较好。分离菌株J22是中华鳖病原菌,养殖时可选用庆大霉素、新霉素或者阿莫西林内服,配合使用二氧化氯、漂白粉及高铁酸钾等外用进行防控。

摘要: 为探究GHRL基因多态性对中华鳖(Pelodiscus sinensis)生长性状的影响,采用直接测序法在GHRL基因上检测到14个单核苷酸多态性位点C289T、G501T、T738C、G776T、A841G、T885C、T2960C、A2987T、G3390A、A3857C、G4718A、T4820C、A4850C、T4979C。随机选取同批繁殖的120只中华鳖用飞行时间质谱法进行SNPs位点的分型,并分析与生长性状的相关性。检测结果显示,所有SNP位点均符合HardyWeinberg平衡状态(P>0.05)。方差分析结果显示,C289T位点CT、CC基因型的5项生长数据均显著高于TT基因型(P<0.05)。S2位点AB基因型的体重、背甲长、背甲宽和裙边宽4项数据均显著高于AA基因型(P<0.05)。G3390A位点AG基因型的背甲长、背甲宽2项数据显著高于AA基因型(P<0.05)。G4718A位点AG基因型的背甲长、背甲宽、裙边宽3项数据显著高于AA基因型(P<0.05)。在GHRL基因上获得的SNP位点可能影响着中华鳖的生长性状或与之紧密连锁,可为中华鳖分子辅助育种提供助力与参考。

摘要: 采用虫蚀法制备了鼋Pelochelys cantorii和中华鳖Pelodiscus sinensis的骨骼标本,对骨骼系统进行了观察、描述、绘图及比较分析。结果显示,鼋的骨骼共169枚,由背甲和腹甲组成的外骨骼、中轴骨和附肢骨组成的内骨骼组成。通过比较鼋和中华鳖的骨骼结构,发现二者在头骨的吻突长度及第三颈椎结构方面有较大差别。鼋眼眶前部至吻突最前端的长度与头骨总长度比为0.082,而中华鳖为0.570,显示中华鳖吻突显著长于鼋。鼋与中华鳖的颈椎骨数目均为9枚,但中华鳖的第三至第九颈椎的横突要更明显,第七颈椎的椎体向上显著翘起,且第九颈椎腹面椎体前端为尖状。从整条颈椎上看,鼋脊椎长度与其背甲长度之比为0.66,中华鳖为1.07,表明中华鳖的颈椎更长;研究结果丰富了鳖科动物的骨骼学基础数据,也为鼋物种鉴定、龟鳖动物系统演化及生态适应性提供骨骼学理论依据。

摘要: 为了研究干扰素基因刺激因子STING在中华鳖(Pelodiscus sinensis)先天免疫中的作用,克隆了中华鳖STING基因(PsSTING)的cDNA序列,其全长为2145 bp,包含1152 bp的开放阅读框,编码383个氨基酸。氨基酸序列比对发现, PsSTING蛋白N端含有4个跨膜区和2个RXR内质网滞留基序, C端有1个解旋酶结构域。qRTPCR结果显示, PsSTING在中华鳖心脏、肝脏、脾脏、肺、肾脏、小肠、胃、皮肤、肌肉和血细胞等组织中均能表达,其中在脾脏中的表达量最高,其次是肝脏、小肠和肺,而在血细胞中的表达量最低;用嗜水气单胞菌、LPS和poly(I:C)刺激后, PsSTING基因呈现出先上调后下调的趋势,在刺激12h时显著高于对照组(P<0.05), 24h达到最高值,在48h后逐渐恢复到初始水平,其蛋白表达量在脾脏和小肠中明显增加。体内RNA干扰后,小肠中PsSTING的表达量显著下调(P<0.05), IFN信号通路中TBK1、IRF3、IRF7、STAT6和IFN-β等基因表达水平显著下调(P<0.05)。在HEK293T细胞中过表达PsSTING基因,能够显著激活pIFN-β-luc的启动子。研究结果表明PsSTING基因参与调控了中华鳖的先天免疫反应。

摘要: 为研究组蛋白H2A对龟鳖动物生殖细胞发育分化作用和机制,克隆了中华鳖(Pelodiscus sinensis)组蛋白H2A变体的同源物(命名为PsH2A),分析其转录本的表达模式及在卵巢发育成熟过程中的细胞定位。PsH2A cDNA序列全长575 bp, 5′端非编码区68 bp, 3′端非编码区108 bp,开放阅读框399 bp,编码133个氨基酸。氨基酸序列比对结果显示其与龟类的H2A变体同源性更高,与哺乳类同源性较低。RT-qPCR和RT-PCR结果显示,PsH2A转录本在1冬龄、2冬龄和3冬龄的中华鳖卵巢中高表达(P<0.01),而在精巢和其他成体组织中几乎检测不到。化学原位杂交结果显示, PsH2A mRNA在卵母细胞中特异性表达,其中初级卵母细胞中表达信号最强,且均匀的分布在细胞质中。随着卵母细胞发育成熟进入到生长期和成熟期后,目的信号逐渐减弱,并且主要在核周区域表达。此外, PsH2A mRNA的相对表达量也表现出中华鳖卵巢发育的季节性变化。综上,研究结果表明PsH2A在中华鳖卵母细胞发育过程中可能发挥着重要作用。