摘要: 【目的】本研究旨在检测ass-milR0037-3p及其关键靶基因在蜜蜂球囊菌Ascosphaera apis侵染中华蜜蜂Apis cerana cerana和意大利蜜蜂A.mellifera ligustica工蜂幼虫过程中的表达模式，为深入探究ass-milR0037-3p调控蜜蜂球囊菌侵染机制提供基础。【方法】使用相关软件预测蜜蜂球囊菌ass-milR0037-3p的靶基因并进行GO和KEGG数据库注释。中华蜜蜂和意大利蜜蜂3日龄工蜂幼虫饲喂含1×10～7孢子/mL蜜蜂球囊菌的饲料后采用stem-loop RT-PCR和RT-qPCR分别验证中华蜜蜂和意大利蜜蜂工蜂6日龄幼虫肠道中ass-milR0037-3p的表达和检测中华蜜蜂和意大利蜜蜂工蜂4-6日龄幼虫肠道中ass-milR0037-3p及其2个关键靶基因组蛋白乙酰转移酶(histone acetyltransferase)基因ESA1和黄素胺氧化还原酶(flavin containing amine oxidase)基因FAO的表达量。【结果】ass-milR0037-3p靶向225个基因，可注释到繁殖、结合和细胞等28个GO条目以及剪接体、次生代谢产物的生物合成及氨基糖和核苷酸糖代谢等105条KEGG通路。蜜蜂球囊菌接种后，中华蜜蜂和意大利蜜蜂工蜂6日龄幼虫肠道中均扩增出ass-milR0037-3p的目的片段；相较于中华蜜蜂4日龄工蜂幼虫，5和6日龄工蜂幼虫肠道中ass-milR0037-3p的表达量均显著上调并且ESA1和FAO的表达量均显著下调；意大利蜜蜂5日龄工蜂幼虫肠道中ass-milR0037-3p的表达量比4日龄工蜂幼虫肠道中的上调，6日龄工蜂幼虫肠道中的比4日龄工蜂幼虫肠道中的显著上调；靶基因ESA1和FAO的表达量在意大利蜜蜂5日龄工蜂幼虫肠道中均比4日龄工蜂幼虫肠道中的上调，在6日龄工蜂幼虫肠道中比4日龄工蜂幼虫肠道中的显著上调。【结论】ass-milR0037-3p通过负调控FAO表达潜在调节蜜蜂球囊菌侵染中华蜜蜂工蜂幼虫的过程，通过正调控ESA1表达潜在影响蜜蜂球囊菌侵染意大利蜜蜂工蜂幼虫的过程。研究结果为阐明milRNA通过调控靶基因的表达来响应蜜蜂球囊菌侵染蜜蜂幼虫肠道的机制提供了基础。

摘要: 【目的】为了解决中华蜜蜂Apis cerana cerana人工授精后精子转移率低的问题，延长授精蜂王在蜂群中产受精卵的时间。【方法】选取中华蜜蜂7日龄的处女蜂王分别注射1, 3和5μL精液，每个剂量包括处理组和对照组，每组5头蜂王。处理组蜂王在授精完成后立即在其腹部末端套上塑料装置，对照组蜂王腹部末端则不套上塑料装置。24 h后，统计处理组和对照组每一蜂王的受精囊内精子数量。【结果】中华蜜蜂授精后的蜂王套上塑料装置进行的物理阻隔可显著提高精子向其受精囊的转移率，特别是蜂王被授精低剂量精液时具有显著优势。精子向受精囊的转移率由传统人工授精时的约11%提高至43%,授精蜂王产受精卵的时间明显延长。应用该方法成功解析了中华蜜蜂的体色遗传规律：中华蜜蜂体色由1对等位基因控制，黄色为显性，黑色为隐性，F₁代杂合蜂王与黑色雄蜂回交子代的三型蜂体色分离比均呈现稳定的1∶1,符合孟德尔遗传规律。【结论】本研究优化的精子转移方法可显著提高人工授精后中华蜜蜂蜂王侧输卵管内精子向受精囊的转移率，特别适用于授精低剂量精液（例如单雄授精）,可成功应用于体色遗传规律的研究中，为中华蜜蜂的选育与种质资源保护提供了理论基础与技术支撑。

摘要: 【目的】本研究旨在探究海拔和季节变化对重庆四面山中华蜜蜂Apis cerana cerana粉源植物组成及多样性的影响。【方法】野外采集重庆四面山不同海拔梯度(500, 700, 900, 1 100和1 300 m)及不同月份(3, 5, 7, 9和11月)中华蜜蜂蜂箱中新鲜巢脾的蜂粮，提取蜂粮粉源植物DNA进行ITS2区PCR扩增，利用Illumina PE250二代高通量测序技术进行测序，利用生物信息学方法分析中华蜜蜂的粉源植物组成、丰度和多样性。【结果】共注释到重庆四面山中华蜜蜂粉源植物30目61科128属162种，其中木本植物101种(占比62.35%)、草本植物51种(占比31.48%)和藤本植物10种(占比6.17%)。在目水平，蔷薇目(Rosales)植物种类最多(21种),其次是壳斗目(Fagales)和菊目(Asterales),分别有19和15种。基于可操作分类单元(operational taxonomic units, OTUs)的中华蜜蜂粉源植物组成分析发现：总占比超过1%的粉源植物有17种，排名前5的依次是茅栗Castanea seguinii、细齿叶柃Eurya nitida、盐麸木Rhus chinensis、甘蓝Brassica oleracea和黄毛楤木Aralia chinensis,占比分别是18.9%, 11.3%, 8.5%, 6.3%和5.3%。中华蜜蜂粉源植物alpha多样性分析结果显示：重庆四面山中华蜜蜂粉源植物多样性随海拔增加呈现先增加后减少的趋势；5月份中华蜜蜂粉源植物多样性最低，而其他月份间粉源植物多样性无显著差异。【结论】重庆四面山中华蜜蜂粉源植物资源丰富，粉源植物多样性随月份变化不明显，而随海拔呈现先增加后减少的趋势。本研究揭示了重庆四面山中华蜜蜂粉源植物组成及多样性的时空变化特征，为进一步研究和保护该地区中华蜜蜂种群提供了新视角，也为当地养蜂人选择合适的蜂场位置、保证花粉资源稳定供应、提高蜜蜂成活率和增加蜂产品产量提供了新思路。

摘要: 【目的】本研究旨在探究蜜蜂慢性麻痹病毒(chronic bee paralysis virus, CBPV)侵染对中华蜜蜂Apis cerana cerana免疫和肠道菌群的影响。【方法】采用注射CBPV RNA的方式使中华蜜蜂新出房成年工蜂感染CBPV,统计存活率；qRT-PCR检测CBPV侵染后中华蜜蜂工蜂体内CBPV基因组拷贝数和15个免疫相关基因(PGRP-S2,Cactus1,Toll,PGRPLC-like,Relish,Defensin1,Hymenoptaecin,SP14,PPO,Dicer,HSP70,HSP90,Stat,Stam和PISA3)的表达量；利用宏基因组测序检测中华蜜蜂工蜂感染CBPV后的肠道菌群结构的变化，并对肠道菌群进行alpha多样性分析和beta多样性分析。【结果】相对于注射1×PBS的对照组，感染CBPV的中华蜜蜂成年工蜂存活率逐渐降低，在感染第7天时的累计存活率降低到了27%;感染第1-4天CBPV基因组拷贝数急剧稳步增加，第4天时CBPV基因组拷贝数增加了10～6倍。同时，CBPV显著激活中华蜜蜂Toll免疫通路基因，尤其抗菌肽基因Defensin1和Hymenoptaecin的表达量在CBPV侵染的第1-5天均显著上调，在侵染第5天，上调倍数超过10倍。宏基因组测序结果显示CBPV侵染影响中华蜜蜂工蜂肠道菌群结构，显著改变肠道菌群多样性，尤其蜜蜂乳杆菌Lactobacillus apis和Snodgrassella alvi的相对丰度在CBPV侵染后较对照显著下调。【结论】CBPV侵染能引起中华蜜蜂工蜂死亡，激活抗菌肽基因的表达，显著减少其肠道中有益菌的相对丰度，研究结果为也为建立蜜蜂新的健康管理策略和防控措施提供重要的理论基础。

摘要: 【目的】本研究旨在丰富中华蜜蜂Apis cerana cerana 14-3-3ζ基因的基本信息，为其进一步的功能研究提供参考和依据。【方法】通过PCR扩增14-3-3ζ基因的编码序列(coding sequence, CDS),再进行TA克隆和Sanger测序；使用相关软件预测14-3-3ζ的理化性质和分子特征，并对14-3-3ζ进行系统进化分析；利用RT-qPCR检测14-3-3ζ基因在中华蜜蜂不同发育阶段(卵、幼虫、预蛹、蛹和成虫)、刚出房工蜂成虫不同组织(触角、中肠、脂肪体、咽下腺、脑、表皮和毒腺)及蜜蜂球囊菌Ascospaera apis接种中华蜜蜂工蜂3日龄幼虫后4, 5和6日龄幼虫肠道中的表达量。【结果】成功克隆到中华蜜蜂14-3-3ζ基因的CDS,含744个核苷酸，编码247个氨基酸，中华蜜蜂14-3-3ζ的分子量约为28.0 kD,含26个磷酸化位点、 4个结构域和1个保守基序，不含跨膜结构域与信号肽；中华蜜蜂、西方蜜蜂Ap.mellifera、黑大蜜蜂Ap.laboriosa、小蜜蜂Ap.florea、芦蜂Ceratina calcarata、火红熊蜂Bombus pyrosoma、地熊蜂B.terrestris、苜蓿切叶蜂Megachile rotundata、壁蜂Osmia lignaria和东南蓝莓蜂Habropoda laboriosa 14-3-3ζ均包含4个相同的保守基序和1个相同的结构域(14-3-3＿1),中华蜜蜂和西方蜜蜂的14-3-3ζ在系统进化树上聚为一支。14-3-3ζ基因在中华蜜蜂卵中的表达量显著高于3日龄幼虫、1和2日龄预蛹及4日龄蛹中的表达量，在中华蜜蜂各日龄工蜂成虫体内的表达量无显著差异；14-3-3ζ基因的表达量在中华蜜蜂刚出房工蜂成虫毒腺中最高，且显著高于触角、中肠、咽下腺、脑、表皮和脂肪体中的表达量；蜜蜂球囊菌接种中华蜜蜂工蜂3日龄幼虫后，14-3-3ζ基因在中华蜜蜂工蜂4, 5和6日龄幼虫肠道中的表达量与对照组比显著下调。【结论】中华蜜蜂14-3-3ζ基因在工蜂的毒腺和卵中特异性高量表达，幼虫肠道中14-3-3ζ基因的表达在蜜蜂球囊菌侵染过程中被激活，14-3-3ζ是一种潜在的亲水性、非跨膜和胞内蛋白，中华蜜蜂与上述其他10种蜂的14-3-3ζ较为保守，中华蜜蜂和西方蜜蜂的14-3-3ζ之间亲缘关系最近。