摘要: 【目的】中华蜜蜂囊状幼虫病毒（Chinese sacbrood virus,CSBV）和东方蜜蜂微孢子虫Nosema ceranae都是严重威胁蜜蜂健康的重要病原，本研究旨在探究2种病原顺序感染对中华蜜蜂Apiscerana cerana存活率、营养代谢和免疫的影响。【方法】设置中华蜜蜂取食正常食物、先喂食CSBV后喂食东方蜜蜂微孢子虫和先喂食东方蜜蜂微孢子虫后喂食CSBV3个处理，利用PCR检测中华蜜蜂在取食第2天和第4天后体内病原增殖情况；通过RT-qPCR检测中华蜜蜂感染病原后第2天和第4天后体内CSBV数量以及营养代谢基因（ilp1、ilp2、hexamerin70b和hexamerin70c）和免疫应答基因（toll、relish、jra、apidaecin、abaecin、defensin、hymenoptaecin和JAK）的表达情况。【结果】先喂食CSBV后喂食东方蜜蜂微孢子虫组的中华蜜蜂体内孢子量高于先喂食东方蜜蜂微孢子虫后喂食CSBV组，而先喂食CSBV后喂食东方蜜蜂微孢子虫组的中华蜜蜂体内CSBV拷贝数显著高于先喂食东方蜜蜂微孢子虫后喂食CSBV组。先喂食CSBV后喂食东方蜜蜂微孢子虫组的中华蜜蜂营养代谢基因ilp1、ilp2、hexamerin70c和hexamerin70b的表达水平随感染时间延长逐渐呈现下调，而先喂食东方蜜蜂微孢子虫后喂食CSBV组中显著上调。先喂食CSBV后喂食东方蜜蜂微孢子虫组中华蜜峰免疫基因toll和relish表达量呈现先增加后下降，而jra、JAK、apidaecin、abaecin、defensin和hymenoptaecin的表达量显著增加，而先喂食东方蜜蜂微孢子虫后喂食CSBV组中8个免疫基因的表达量均显著增加。【结论】在顺序感染过程中，东方蜜蜂微孢子虫的感染抑制CSBV的增殖，而CSBV的感染则有助于东方蜜蜂微孢子虫的增殖。先喂食CSBV比先喂食东方蜜蜂微孢子虫对中华蜜蜂营养和生长发育的影响更显著，且更易引起宿主的免疫防御，表明CSBV与东方蜜蜂微孢子虫顺序感染中蜂后引起的免疫应答及营养代谢更为复杂。

摘要: 【目的】miRNA在昆虫的生长、发育和代谢等诸多生物学进程中发挥关键调控作用。本研究对ace-miR-3759-y进行表达和序列验证，并通过过表达与敲降ace-miR-3759-y探究其对中华蜜蜂Apis cerana cerana幼虫靶基因表达及重量的影响，以期为ace-miR-3759-y调控幼虫发育的分子机理研究提供依据。【方法】通过Stem-loop RT-PCR和Sanger测序验证ace-miR-3759-y的表达和序列。通过饲喂模拟物(Mimic)和抑制物(Inhibitor)对中华蜜蜂幼虫血淋巴中的ace-miR-3759-y进行过表达和敲降。利用RT-qPCR检测ace-miR-3759-y的过表达和敲降效果及靶基因相对表达量。利用电子天平对幼虫进行称重。【结果】ace-miR-3759-y在中华蜜蜂幼虫肠道和血淋巴中真实存在和表达。相较于Mimic-NC组，ace-miR-3759-y在Mimic-ace-miR-3759-y组4日龄和5日龄幼虫血淋巴中显著上调（P<0.05），在6日龄幼虫血淋巴中上调表达但组间差异不显著（P>0.05）。相较于Inhibitor-NC组，Inhibitor-ace-miR-3759-y组4、5和6日龄幼虫血淋巴中均显著下调表达（P<0.05）。过表达ace-miR-3759-y后，CIC在4、5和6日龄幼虫血淋巴中的表达量均显著下调（P<0.05）;CKI在4日龄和5日龄幼虫血淋巴中的表达量显著下调（P<0.05），在6日龄幼虫血淋巴中下调表达但组间差异不显著（P>0.05）。敲降ace-miR-3759-y后，CIC在5日龄幼虫血淋巴中显著上调表达（P<0.05），在4日龄和6日龄幼虫血淋巴中上调表达但组间差异不显著（P>0.05）;CKI在4日龄幼虫血淋巴中显著上调表达（P<0.05），在5日龄和6日龄幼虫血淋巴中上调表达但组间差异不显著（P>0.05）。此外，与Mimic-NC组相比，Mimic-miR-3759-y组的6日龄幼虫的体重下降，但组间差异不显著（P>0.05）；与Inhibitor-NC组相比，Inhibitor-miR-3759-y组的6日龄幼虫体重上升，但组间差异不显著（P>0.05）。【结论】通过饲喂Mimic和Inhibitor的方法在中华蜜蜂幼虫血淋巴中实现了ace-miR-3759-y的有效过表达及敲降，ace-miR-3759-y负调控CIC和CKI的表达，ace-miR-3759-y对幼虫体重无显著影响。

摘要: 【目的】为了探究蜜蜂信息素对中华蜜蜂Apis cerana cerana的生产及繁殖性能的影响。【方法】以蜂蜡为载体，选择4种蜂王上颚腺信息素（9-ODA:9-HDA:HOB:HVA）与蜜蜂幼虫饥饿信息素（β-罗勒烯）按照一定比例组配了4种强蜂素挂片（T1-1组、T1-2组、T2-1组、T2-2组），同时设置一个纯蜂蜡挂片作为空白对照组（CK组）。将2种组配强蜂素（T1-1、T1-2）分别置于特殊密闭容器瓶中，15、30和45 d后用捕集针抽取密闭容器瓶气体，利用气相-质谱联用系统测定2种组配强蜂素（T1-1、T1-2）中β-罗勒烯挥发含量。并系统研究了4种组配强蜂素对无王群急造王台以及对有王群的蜂蜜产量、群势和封盖子数影响。【结果】在15、30和45 d时，2种组配强蜂素中β-罗勒烯挥发量差异不显著（P> 0.05），即2种组配强蜂素中β-罗勒烯都能稳定释放；与对照组相比，T1-2组封盖王台出现时间显著延迟（P<0.05），推迟时间2.17d，但4个实验组间出现封盖王台出现时间差异不显著（P>0.05）;T1-1组蜂蜜产量和封盖子数显著高于对照组（P <0.05），蜂蜜产量和封盖子数量分别30.18%和30.00%;T1-2组蜂群群势显著强于对照组（P <0.05），提高群势25.15%;4个实验组间蜂蜜产量、封盖子数和蜂群群势都差异不显著（P> 0.05）。【结论】不同组配的蜜蜂信息素对中华蜜蜂生产及繁殖性能都有积极作用，为进一步在养蜂生产中推广蜜蜂信息素产品提供了理论支撑。

摘要: 【目的】本研究拟利用已获得的中华蜜蜂Apis cerana cerana幼虫肠道的转录组数据对单核苷酸多态性（Single nucleotide polymorphism,SNP）和插入缺失（Insertion-Deletion,InDel）突变位点进行挖掘和分析，旨在丰富中华蜜蜂的SNP和InDel信息，并为新型分子标记的开发提供基础。【方法】根据有效读段与东方蜜蜂Apis cerana参考基因组的比对情况，采用GATK软件识别单碱基错配和碱基的插入缺失情况，再利用ANNOVAR软件对SNP位点和InDel位点进行分析。通过相关生物信息学软件将SNP和InDel位点所在基因分别比对GO和KEGG数据库，以获得相应的功能和通路注释。【结果】共鉴定到中华蜜蜂的58 919个SNP位点，包括24 548个纯合位点和34 371个杂合位点；发生转换和颠换的SNP位点分别有49102和9817个；数量最多和最少的突变类型分别是C/T和T/G；分布在外显子区的SNP位点数量最多，达到22 649个；此外，发生同义突变的SNP位点数量最多，其次是非同义突变；SNP位点所在基因可注释到46个GO条目和121条KEGG通路。共鉴定到6 551个InDel位点，包括3 270个插入突变和3 281个缺失突变；分布在内含子区InDel位点最多，共计2 793个；发生移码插入的InDel位点最多；进一步分析结果显示InDel位点所在基因可注释到27个GO条目和28条KEGG通路。【结论】本研究鉴定到中华蜜蜂的大量SNP位点和InDel位点，解析了SNP和InDel位点的突变类型、基因组功能元件分布和密码子突变类型，并揭示SNP和InDel位点对中华蜜蜂的重要生物学过程具有潜在影响。

摘要: 【目的】本研究旨在明确中华蜜蜂Apis cerana cerana热休克蛋白70(Heat shock protein 70,HSP70)与中蜂囊状幼虫病毒(Chinese sacbrood virus,CSBV)的关系。【方法】首先根据NCBI上已公布的中华蜜蜂HSP70的全基因(NO.MH122655.1)序列,设计特异性引物,提取3日龄中华蜜蜂幼虫总RNA,通过RT-PCR方法获得HSP70基因,并通过生物信息学软件进行分析;其次将其克隆到原核表达载体pET-32a中,转化入大肠杆菌BL21(DE3)进行蛋白表达,并制备重组蛋白,将纯化的重组蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体;最后利用制备多克隆抗体作为一抗,通过Western-blot方法检测CSBV感染中华蜜蜂前后HSP70在幼虫体内的变化。【结果】成功获取中华蜜蜂HSP70蛋白的全基因,其核苷酸序列全长为1 833 bp,生物信息学分析后,发现其编码蛋白存在7个抗原表位。利用原核表达系统,成功获得大小约87 ku的重组蛋白HSP70,免疫小鼠后获得多克隆抗体,经Western-blot分析能与标签蛋白发生特异性反应;对感染CSBV前后蜜蜂体内HSP70蛋白检测发现感染后HSP70表达水平显著提高。【结论】通过原核表达系统,成功表达中华蜜蜂HSP70基因和HSP70多克隆抗体,并证实CSBV感染后影响中华蜜蜂体内HSP70蛋白表达量的改变,为深入研究HSP70功能提供了帮助。