摘要: 【目的】克隆鉴定中华蜜蜂Apis cerana cerana的Orco嗅觉受体基因,并对其在工蜂触角上进行免疫荧光定位。【方法】利用RT-PCR技术克隆中华蜜蜂Orco基因,并对其编码的氨基酸序列进行生物信息学分析,使用Real-time PCR技术鉴定其在中华蜜蜂不同发育时期及不同组织的表达谱;利用免疫荧光定位技术在中华蜜蜂工蜂触角中对Orco进行亚细胞定位。【结果】获得中华蜜蜂Orco基因的全长cDNA序列,命名为AcerOrco(GenBank登录号:JF968610.1),其全长为1434bp,编码477个氨基酸,预测其含7个跨膜结构以及4个位于细胞膜外的亲水区。表达谱分析显示,AcerOrco在卵、幼虫和蛹期呈低丰度表达,1日龄及内勤蜂时期主要在触角和足中表达,且在1日龄的触角中表达量最高;采集蜂时期的触角、头(去除触角)、胸、腹和翅中均有较高丰度的表达。亚细胞定位结果显示,AcerOrco不仅在采集蜂触角鞭节上大量表达(尤其在触角鞭节第1亚节中表达量较高),而且常成对出现,并且发现AcerOrco可能主要在触角毛形感器的外部神经元(outer dendrite,OD)以及板形感器的树突神经元中表达。【结论】成功克隆了AcerOrco基因全长,获得了其表达谱,且将其定位于工蜂采集蜂的触角感器神经元上,最终推测AcerOrco与中蜂嗅觉发育和触角感器功能密切相关。

摘要: 为探究中华蜜蜂Apis cerana cerana dynactin p62基因的表达特性,本研究克隆了中华蜜蜂dynactin p62的基因组DNA序列(GenBank登录号:JX101463)和mRNA序列(GenBank登录号:JX101464);采用荧光定量PCR检测了中华蜜蜂dynactin p62在不同发育时期(3日龄和6日龄幼虫、刚羽化出房蜜蜂)三型蜂中mRNA的表达量。结果表明:该基因基因组DNA序列全长为2403bp,mRNA序列全长为1491bp,编码496个氨基酸残基,预测的蛋白分子量为56.49kD,等电点为8.31。系统发育分析表明中华蜜蜂dynactin p62与西方蜜蜂Apis mellifera dynactin p62聚成一支。该基因在不同发育时期均有表达,在雌性蜜蜂(蜂王和工蜂)中,刚羽化成虫期的表达量显著高于幼虫期(P<0.05),并且同一发育时期相比,工蜂的表达量显著高于蜂王(P<0.05);而该基因在雄蜂中表达量没有明显的规律性。这些结果提示该基因可能与中华蜜蜂级型分化有关。

摘要: 分别从中华蜜蜂Apisceranacerana和意大利蜜蜂Apismellifera工蜂毒腺中抽提总RNA ,通过RT PCR方法扩增 ,各得到了蜂毒前溶血肽原蛋白的cDNA ,再将扩增产物克隆到pGEM Teasy载体上 ,进行测序和序列分析。结果表明 ,所扩增到的这两个片段长度均为 2 13bp ,均为编码蜂毒前溶血肽原的cDNA ,并分别推导出两者所编码的氨基酸序列。经序列比较 ,中华蜜蜂前溶血肽原与意大利蜜蜂、印度蜜蜂Apisceranaindica前溶血肽原的同源性都为 97%。所报道的中华蜜蜂蜂毒前溶血肽原的核苷酸序列的GenBank登录号为AF48790 7。

摘要: 采用中华蜜蜂ApisceranaceranaF .临床自然发病的欧洲幼虫腐臭病 (EuropeanFoulbrood ,EFB)幼虫 ,对其病原体进行了分离鉴定。结果表明 :中华蜜蜂EFB的病原系蜂房蜜蜂球菌Melissococcuspluton。该菌为革兰氏阳性的兼性厌氧菌 ,形态学及染色特性、致病性试验、血清学试验和细菌DNAG +Cmol%试验均证明中华蜜蜂和西方蜜蜂的EFB病原属于同属的蜂房蜜蜂球菌。生理生化特性结果与国外的早期研究结果相近似。该试验为不同地理位置、不同种寄主间蜂房蜜蜂球菌的遗传差异的研究 ,以及中华蜜蜂EFB病的防治学研究打下基础

摘要: 构建含中华蜜蜂溶血肽基因的重组转移载体pBacHT_GFPTAccM,转化受体菌DH10Bac,得重组穿梭载体Bacmid_GFPTAccM,Lipofectin介导其基因组DNA转染粉纹夜蛾细胞系Tn_5B1_4。SDS_PAGE分析表明,感染重组杆状病毒Bacmid_GFPTAccM的细胞表达产物在约为34kD处出现特异性条带,其表达量约占细胞总蛋白的3%。Westernblotting和细胞表达时相动态分析证明中华蜜蜂溶血肽基因已在粉纹夜蛾细胞系Tn_5B1_4中进行了成功的表达。