摘要: 为了筛选与中华拟同形溞(Daphnia sinensis)生殖相关的基因,选择4个生长阶段的中华拟同形溞(雌性幼溞JF、成熟前1龄雌溞BM、第1成龄雌溞MA和第4成龄雌溞RF)进行转录组测序。在BM vs. JF、MA vs. JF、RF vs. JF、RF vs. MA、MA vs. BM、RF vs. BM等6个组合中,选择每个组合的前30个上调基因进行筛选,获得了163个差异表达基因。这些差异表达基因以鱼类信息素培养的第4成龄雌溞为样本进行RT-qPCR检测,共筛选出19个与生殖相关的候选基因,选择其中2个基因(Cluster-13168.32243, Dsussp和Cluster-13168.22885,Dsmapk)进行RNAi实验。在RNAi后, Dsussp和Dsmapk基因的表达量在含有其dsRNA的大肠杆菌(Escherichia coli)浓度组均显著小于对照组(Enhanced Green Fluorescent Protein, EGFP),且与EGFP组相比, Dsmapk和Dsussp基因的表达量在2%和5%大肠杆菌浓度组分别下降了28.1%和32.3%、41.1%和55.6%。在RNAi后,中华拟同形溞在Dsussp和Dsmapk组的怀卵数及产幼溞数与对照组相比均减少,且5%大肠杆菌浓度组均小于2%大肠杆菌浓度组。随着龄数的增加, RNAi对中华拟同形溞怀卵数和产幼溞数的抑制影响均加强。因此,Dsussp和Dsmapk基因被证实在中华拟同形溞的生殖发育中起重要作用。

摘要: 为了阐明卵黄蛋白原基因对溞属枝角类生殖和胚胎发育的影响机制,研究了RNA干扰下中华拟同形溞(Daphnia sinensis)的卵黄蛋白原基因表达及产幼溞数变化。结果表明, RNA干扰后,与EGFP (Enhanced green fluorescent protein)组相比, 2%大肠杆菌浓度下中华拟同形溞在Vtg组的首次产幼溞数和Vtg基因相对表达量没有显著差异; 5%大肠杆菌浓度下中华拟同形溞前四个成龄在Vtg组的产幼溞数均显著小于EGFP组,且中华拟同形溞的第一成龄、第四成龄时在Vtg组的Vtg基因相对表达量均显著小于EGFP组,分别下降了5.25%和78.03%。此外, RNA干扰后Vtg组的中华拟同形溞还出现了胚胎消解和后代发育不全的现象。结果表明,高强度、长时间的RNA干扰能够显著降低中华拟同形溞Vtg基因的相对表达水平,也能够显著抑制其生殖量和胚胎发育。因此, Vtg基因对中华拟同形溞的生殖和胚胎发育起重要作用。