摘要: 【目的】解析东方蜜蜂Apis cerana DNA甲基转移酶3（DNA methyltransferase 3, DNMT3） AcDNMT3的分子特征、系统进化及基因表达谱，为深入开展AcDNMT3的功能研究提供参考和基础。【方法】利用相关生物信息学软件预测和分析东方蜜蜂AcDNMT3的理化性质、分子特征、结构域、保守基序和系统进化。采用RT-qPCR检测AcDNMT3在东方蜜蜂工蜂不同发育阶段（卵、3日龄幼虫、1日龄预蛹、2日龄预蛹、4日龄蛹以及1, 2, 6, 12, 15和18日龄成虫）和工蜂成虫组织（触角、咽下腺、脑、表皮、中肠、脂肪体和毒腺）及蜜蜂球囊菌Ascosphaera apis接种东方蜜蜂3日龄工蜂幼虫后4-6日龄幼虫肠道和东方蜜蜂微孢子虫Nosema ceranae接种东方蜜蜂1日龄工蜂成虫后2-5日龄成虫中肠中的相对表达量。【结果】AcDNMT3含758个氨基酸，分子量约为88.24 kD,分子式为C₃₉₄₅H₆₁₈₂N₁₀₇₆O₁₁₃₄S₄₄,理论等电点为8.32,平均亲水指数为-0.454。AcDNMT3与腺苷同型半胱氨酸酶（A0A2A3ECJ8）等10个蛋白具有潜在的互作关系。东方蜜蜂、西方蜜蜂Ap.mellifera、大蜜蜂Ap.dorsata、黑大蜜蜂Ap.laboriosa、欧洲熊蜂Bombus terrestris、巴西无刺蜂Frieseomelitta varia、果树壁蜂Osmia lignaria、大分舌蜂Colletes gigas、行军蚁Eciton burchellii、黄褐尼氏蚁Nylanderia fulva、阿根廷蚁Linepithema humile、红火蚁Solenopsis invicta、小黄家蚁Monomorium pharaonis和埃氏扁胸切叶蚁Vollenhovia emeryi的DNMT3含有4个相同的结构域（PWWP＿DNMT3, ADDz＿Dnmt3, Dcm domain和PWWP domain）及5个相同的保守基序（Motif1, Motif2, Motif3, Motif4和Motif5）。AcDNMT3与西方蜜蜂的DNMT3在进化树上聚为一支。AcDNMT3在东方蜜蜂工蜂卵、幼虫、预蛹和蛹中差异表达，在2日龄预蛹中的表达量最高且显著高于卵、3日龄幼虫、1日龄预蛹和4日龄蛹中的表达量。AcDNMT3在东方蜜蜂1, 2, 6, 12, 15和18日龄工蜂成虫体内差异表达，在1日龄成虫体内的表达量最高且显著高于2, 6, 12, 15和18日龄成虫体内的表达量。AcDNMT3在东方蜜蜂工蜂成虫触角、毒腺、脑、中肠、脂肪体、表皮和咽下腺中差异表达，在触角中的表达量最高，而在中肠中的表达量最低。蜜蜂球囊菌接种东方蜜蜂3日龄工蜂幼虫后4日龄工蜂幼虫肠道中AcDNMT3的表达量比对照显著下调。东方蜜蜂微孢子虫接种东方蜜蜂1日龄工蜂成虫后2, 4和5日龄工蜂成虫中肠中AcDNMT3的表达量比对照显著上调，而3日龄工蜂成虫中肠中AcDNMT3的表达量比对照极显著下调。【结论】AcDNMT3可能是亲水性蛋白、胞内蛋白和非跨膜蛋白；DNMT3在东方蜜蜂和上述其他昆虫中高度保守；东方蜜蜂与西方蜜蜂的DNMT3同源性最高；AcDNMT3潜在参与东方蜜蜂工蜂发育、幼虫应答蜜蜂球囊菌侵染和成虫应答东方蜜蜂微孢子虫侵染。

摘要: 蜜蜂微孢子虫(Nosema apis及Nosema ceranae)是微孢子虫的典型代表之一,由它寄生蜜蜂所产生的疾病,称为蜜蜂微孢子虫病。通过目前国际上普遍使用的克隆16srRNA基因(16srDNA)的片段并测序的方法来进行蜜蜂微孢子虫在我国主要养蜂地区的分布情况。结果表明,在我国主要养蜂地区,造成大量西方蜜蜂患蜜蜂微孢子虫病的是东方蜜蜂微孢子虫Nosema ceranae,至今为止未发现过去我们广泛认定的西方蜜蜂微孢子虫Nosema apis。

摘要:

摘要: 【目的】本研究旨在通过检测东方蜜蜂Apis cerana的croquemort基因AcCrq的时空表达谱并解析AcCRQ蛋白理化性质和分子特性，为AcCRQ的功能研究提供参考和基础。【方法】RT-PCR扩增AcCrq的编码序列（Coding sequence,CDS）。利用相关软件预测AcCRQ蛋白的理化性质和分子特性，鉴定东方蜜蜂和其他物种AcCrq的保守基序和结构域，并比对氨基酸序列和构建系统进化树。【结果】RT-qPCR检测AcCrq在东方蜜蜂工蜂的触角、中肠、脑、咽下腺、脂肪体、毒腺和表皮组织，以及卵、幼虫、预蛹、蛹和不同日龄工蜂成虫中的相对表达量。成功验证到AcCrq,CDS含有1 719个核苷酸，可编码572个氨基酸。AcCRQ蛋白的分子量约为65.44 kDa，分子式为C₂₉₆₉H₄₅₅₄₀N₇₆₄O₈₆₄S₂₁，等电点为5.96，平均亲水系数为-0.30，含23个丝氨酸磷酸化位点，9个酪氨酸磷酸化位点和17个苏氨酸磷酸化位点，但不存在典型的信号肽。AcCRQ在黑大蜜蜂Apis laboriosa、小蜜蜂Apis florea、西方蜜蜂Apis mellifera、兰花蜂Eufriesea mexicana、东南蓝莓蜂Habropoda laboriosa、红壁蜂Osmia bicornis bicornis和蓝果园壁蜂Osmia lignaria中具有较高的氨基酸序列一致性；东方蜜蜂与小蜜蜂和西方蜜蜂的CRQ进化距离最近。AcCrq在工蜂成虫触角、中肠、脑、咽下腺、脂肪体、毒腺和表皮中均有表达，但表达量存在差异，触角中AcCrq的表达量显著高于其他组织的表达；AcCrq在东方蜜蜂工蜂卵、幼虫、预蛹和蛹中均有表达，但表达量存在差异，相较于在卵中的表达量，3日龄幼虫和8日龄预蛹中AcCrq的表达量显著降低，而7日龄预蛹和12日龄蛹中AcCrq的表达量下调但不显著；AcCrq在1日龄、2日龄、6日龄、12日龄、15日龄和17日龄工蜂体内均有表达，但表达量也存在差异，1日龄成虫体内AcCrq的表达量均显著高于其他日龄成虫体内的表达量，2和17日龄成虫体内的表达量均低于其他日龄成虫体内的表达量。AcCRQ是潜在的亲水性蛋白但不具分泌功能；东方蜜蜂和其他8个物种的CRQ具有较高的保守性；东方蜜蜂与小蜜蜂和西方蜜蜂的CRQ进化距离最近。【结论】AcCrq在东方蜜蜂工蜂的不同组织和发育阶段动态差异表达。