摘要: 由于环境、气候的恶化以及疾病的侵害,全球两栖动物种群数量呈现出整体衰退的趋势,其中虹彩病毒属蛙病毒科的蛙病毒是不可忽略的原因之一。环介导等温扩增技术(loop-mediated-isothermal-amplification,LAMP)是一种新型的核酸扩增技术,具有特异性强、快速、简便等特点,本研究利用LAMP技术,开发了针对中国东北林蛙种蛙蛙病毒的快速检测方法,针对蛙病毒MCP基因设计出能特异识别靶序列上6个位点的4条特异性引物,在链置换聚合酶(Bst酶)的作用下,62℃扩增30 min。通过对实验参数的优化,扩增后病毒的最低检出数可达到10～2个拷贝。该方法可用于东北林蛙养殖厂种蛙蛙病毒的临床快速检测,保证种蛙的存活质量和数量。

摘要: TBK1是IKKs蛋白激酶家族中的一员,也是免疫应答的重要调节因子之一,在Toll样受体通路等多条信号通路中均能发挥作用。Toll受体作为先天免疫中最为重要的一类模式识别受体,能够特异性地识别病原微生物的保守结构。为了探究东北林蛙在LPS和嗜水气单胞菌刺激下TBK1表达量变化的规律,本研究运用荧光定量PCR检测东北林蛙在嗜水气单胞菌和LPS两种不同的刺激源刺激下肾脏、肺脏、脾脏和肝脏中TBK1的表达水平。结果表明:在嗜水气单胞菌和LPS处理下,肾脏、肺脏、脾脏和肝脏中的TBK1表达量变化显著(P <0. 01),但在不同组织中,LPS和嗜水气单胞菌刺激下TBK1的表达量变化趋势并不完全一致。推测在不同的组织中不同的刺激源产生免疫应答的时间不尽相同。和不同物种的实验数据对比分析,发现各物种TBK1分子的表达量变化关系的规律不显著,推测在不同物种的不同器官中,受到外源微生物侵染时会有选择的激活不同的信号转导通路完成免疫应答。

摘要: 在黑龙江省伊春林区捕获的呈"红腿病"体征的东北林蛙(Rana dybowskii),从其肝脏和腹腔积液中分离出一致病菌株RY-1,通过对分离菌株形态特征、生理生化、16 S rDNA基因序列和系统发育树等分析进行菌种鉴定,并用该菌株RY-1人工感染健康东北林蛙后观察其肝脏组织病理学变化。结果显示,菌株RY-1形态呈浅黄色有光泽的圆形、中央凸起、边缘光滑、直径为1.5～2 cm的菌落,革兰氏染色阴性,16S rDNA的系统发育树等结果分析判定为嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)。随着感染时间延长(12～72 h),肝细胞变性,呈空泡样变,细胞间隙增大,炎性细胞浸润逐渐明显。本研究分离并鉴定了1株东北林蛙源嗜水气单胞菌,并首次探讨了人工感染嗜水气单胞菌的东北林蛙病理学变化,对其疾病防控和健康养殖具有重要参考意义。

摘要: PDK1是PI3K/Akt信号通路中的一个重要的激酶。在哺乳动物中,PI3K/Akt信号通路是一条保守的通路,通过激活下游的因子对糖代谢、脂肪代谢以及蛋白质代谢,细胞的增殖、分化、凋亡等起调节控制作用。本研究基于东北林蛙转录组数据,从中鉴定出PDK1基因3条Unigene序列,并通过RACE法克隆了PDK1基因的全长cDNA,命名为rdPDK1,其全长为1 990 bp,开放阅读框长1 674 bp,编码557个氨基酸。进行生物信息学分析,推测该基因编码的蛋白质相对分子质量63.7 kD,等电点为7.21。该蛋白第82～344个和443～549个氨基酸是2段保守结构域STKc激酶域和PH调节结构域。同源性分析表明rdPDK1蛋白与HsPDK1蛋白氨基酸序列一致率为79%,相似率为100%;与MmPDK1蛋白氨基酸序列一致率为80%,相似率为100%。本研究结果有望为进一步研究东北林蛙PI3K/Akt信号通路中PDK1基因的特性及功能奠定基础。

摘要: 为初步了解林蛙油重金属的污染现状,采集东北林蛙、黑龙江林蛙和中国林蛙的林蛙油,以湿法消化法消化,利用荧光比色法测定锡含量、原子吸收法分别检测镉、铬、铜和铅的含量,并采用单因子污染指数及每周可耐受摄入量分别评价5种重金属在3种林蛙油中的污染程度并对其食用安全进行评价。结果表明,该批次样品中东北林蛙蛙油重金属含量分别为锡10～20、镉50～90、铬670～720、铜100～250和铅60～90μg/kg;黑龙江林蛙蛙油重金属含量分别为锡12～22、镉80～110、铬700～820、铜150～250和铅80～100μg/kg;中国林蛙蛙油重金属含量分别为锡2～10、镉30～60、铬590～700、铜800～130和铅30～60μg/kg,5种金属分别在3种林蛙油内的含量差异显著。单因子污染指数结果显示3种林蛙油中锡、铅的含量均未超过轻度污染指数;铬、镉的含量,除中国林蛙蛙油中铬为轻度污染,其余皆为中度污染,根据样本数据可知仅黑龙江林蛙油镉超标40%,其余皆在食品污染物限量国家标准范围之内。根据每周可耐受摄入量评定,其结果显示3种林蛙油的食用风险依次是铬>镉>铜>铅>锡。因此本批次所检测的林蛙油可食性良好,但仍有必要监测林蛙油中镉、铬的含量。