摘要: 应用种群累积培养法,就培养液的pH值对日本三角涡虫的生存、种群增长、无性生殖以及涡虫超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、乳酸脱氢酶(LDH)、Na+-K+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶等6种酶活力的影响进行了探讨。结果表明,涡虫存活的pH上限为11.0,下限为3.0,涡虫存活的最适pH范围为4.5—8.5;pH值对涡虫种群增长有显著影响,种群密度及种群瞬时增长率均随pH的不同而明显改变。培养27d后,pH4.0—9.0时涡虫种群为正增长:pH4.5—6.5时,涡虫种群密度最高,pH7.5—8.5时次之,pH7.0时较低,pH4.0和9.0时最低;而pH9.5时为负增长。当pH值偏离7.0(偏酸或偏碱)时CAT、GSH-PX、Na+-K+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶活力整体均呈现增加的趋势,而SOD和LDH活力整体呈下降趋势。pH值偏离7.0(偏酸或偏碱)时涡虫6种酶活力均产生明显的变化,这与pH4.5—6.5和pH7.5—8.5时涡虫具有比pH7.0实验组涡虫较高的无性横裂生殖率之间可能存在一定的内在联系。本文研究结果可为实验室培养日本三角涡虫提供适宜的pH值指标。

摘要: 采用压片法对不同产地的淡水三角涡虫染色体进行研究,结果表明,湖北省武汉市珞珈山的淡水三角涡虫体细胞中有16条染色体,为二倍体(2n=2x=16m);江苏省太湖东山岛的淡水三角涡虫体细胞中有24条染色体,为三倍体(2n=3x=24m);贵州省遵义市凤凰山的淡水三角涡虫体细胞同时存在24条染色体和16条染色体两种分裂相,为混倍体。本文根据组型分析的结果对上述三个产地淡水三角涡虫的分类和染色体倍性进行了初步研究。另外,本研究中还发现涡虫染色体倍性的变化与涡虫生殖方式的转变以及环境温度有一定的联系。

摘要: 利用空气干燥法,对采自云南省丽江市束河古镇、保山市龙王塘和香格里拉市小中甸3产地淡水三角涡虫(Dugesia sp.)的染色体和核型进行分析,结果表明:丽江市束河古镇淡水三角涡虫体细胞的染色体数目以16条为主,为二倍体(2n=2x=16=16m);保山市龙王塘淡水三角涡虫体细胞的染色体数目以24条为主(2n=3x=24=24m),少数为16条(2n=2x=16=16m),为三倍体和为二倍体的混合倍体;值得注意的是:香格里拉市小中甸淡水三角涡虫体细胞的染色体数目以极少见的26条为主(2n=3x+2=24+2=21m+3st+2m),少数为25条(2n=3x+1=24+1=21m+3st+1m)和24条(2n=3x=24=21m+3st),为三倍性混合倍体。研究根据核型结果对上述三产地淡水三角涡虫的分类和染色体非整倍性进行了分析。

摘要: 热休克蛋白70是热休克蛋白家族中的重要成员,它在保护生物体免受各种胁迫中发挥重要作用。由于其惊人的再生能力,淡水涡虫作为研究再生和发育的模式动物受到研究者关注。但是,有关涡虫抗逆性的分子机制却少有报道。研究采用RACE(Rapid amplification of cDNA end)技术首次从日本三角涡虫中克隆出hsp70(Djhsp70)全长cDNA序列。Djhsp70 cDNA全长2066bp,含有1947bp的开放阅读框,编码648个氨基酸,分子量71.18kD,GenBank登录号EU380241。DjHSP70的氨基酸含有真核生物HSP70家族蛋白的三个标签序列(9–16位的IDLGTTYS、199—206位的DLGGGTFD、334–339位的IVLVGG)和末端高度保守序列EEVD。经BLAST检索分析,Djhsp70的核苷酸序列和推定的氨基酸序列与目前已知HSP70家族成员高度同源。有趣的是,HSP70亲缘关系分析表明:涡虫更靠近脊椎动物,而与无脊椎动物果蝇和线虫相距较远。为了制备抗体研究DjHSP70的组织学定位,实验还成功构建了DjHSP70表达载体,在IPTG诱导下表达出约76kD的融合蛋白。Djhsp70 cDNA的克隆与表达载体的构建为下一步工作奠定了基础。

摘要: 以日本三角涡虫Dugesia japonica为研究对象，通过cDNA末端快速扩增技术首次获得涡虫hsp60基因，cDNA全长1 851 bp，编码575个氨基酸的蛋白质，命名为DjHSP60。生物信息学分析表明，DjHSP60含有HSP60家族的标签序列和末端重复序列GGM，亚细胞定位分析显示该蛋白定位于线粒体，属于线粒体HSP60家族。整体原位杂交和双荧光原位杂交显示，Djhsp60阳性细胞主要分布在实质组织中，具有干细胞的特征。涡虫切割后再生1 d,Djhsp60在伤口处的组织中表达显著增强，但随着再生进行，表达量逐渐降低。采用RNAi技术敲除Djhsp60导致涡虫头部逐渐退化，失去再生能力。原位杂交和qPCR研究结果证明，RNAi-Djhsp60下调干细胞相关基因的表达。上述结果揭示Djhsp60在涡虫再生中可能发挥重要作用，为进一步研究Djhsp60调控涡虫干细胞增殖的分子机制奠定了良好基础。