摘要: 为研究三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)高迁移率族蛋白B(High-mobility group box protein,HMGB)在其先天免疫中发挥的功能,利用RACE技术首次克隆得到了三疣梭子蟹HMGBa基因,命名为Pt HMGBa。其c DNA序列全长1030 bp,其中5′端非编码区(UTR)为94 bp,3′端非编码区(UTR)为255 bp,开放阅读框(ORF)为681 bp,编码一个含有227个氨基酸,分子量25.82 k D,理论等电点为5.94的蛋白质。Pt HMGBa蛋白包含2个HMG盒结构域和一个酸性尾部结构域。分析表明,三疣梭子蟹HMGBa氨基酸序列与凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)HMGBa相似度最高。实时荧光定量PCR结果显示,Pt HMGBa基因在血细胞和肝胰腺的表达量最高,在眼柄中表达量最低。在副溶血弧菌和WSSV感染过程中,Pt HMGBa基因在肝胰腺和血细胞中均出现了表达上调。其中,经副溶血弧菌感染后,该基因在上述2种组织中分别于48h和6h达到表达量的峰值;经WSSV感染后,该基因在2种组织中均在12h达到表达量的峰值。结果表明Pt HMGBa基因参与了三疣梭子蟹抵御外来病原的免疫响应,研究为深入开展三疣梭子蟹和其他甲壳动物的免疫调控机理提供了科学依据。

摘要: 为研究Na~+/H~+-exchanger基因在三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)盐度胁迫过程中的功能作用,克隆了三疣梭子蟹Na~+/H~+-exchanger基因并进行表达分析。结果显示,Na~+/H~+-exchanger基因(Gen Bank:KU519329)全长4233 bp,5?和3?非编码区(UTR)长分别为519和753 bp,开放阅读框(ORF)长2961 bp。编码986个氨基酸,预测蛋白质分子量和等电点分别为110.8 k D和7.42,具有信号肽和典型的Na~+/H~+-exchanger蛋白结构域,含12个跨膜α螺旋;三疣梭子蟹Na~+/H~+-exchanger基因与普通滨蟹(Carcinus maenas)同源性最高,达到87.2%,系统进化分析也显示该序列与普通滨蟹聚为一支;表达分析显示,三疣梭子蟹Na~+/H~+-exchanger基因在鳃中表达量最高;在低盐(盐度5、10和20)胁迫过程中,Na~+/H~+-exchanger基因在0—12h上调表达明显,在24—168h间表达量呈下降趋势;在高盐(盐度50)胁迫初期(0—12h),该基因表达量相对稳定,之后(24—168h)显著下调表达。研究表明低盐显著诱导Na~+/H~+-exchanger基因的高表达,推测三疣梭子蟹Na~+/H~+-exchanger基因在低盐环境下发挥重要的渗透调节功能。

摘要: 为探讨泛素样含PHD和环指域蛋白1(UHRF1)基因在三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)发育过程中的作用,实验采用SMART RACE方法,克隆了三疣梭子蟹UHRF1(PtUHRF1)基因。该基因cDNA全长为2849 bp,开放阅读框(ORF)为2298 bp,预测其编码1个含有765个氨基酸的蛋白质。结构域分析显示,该蛋白质包含UBL、PHD、TTD、SRA、RING finger 5个功能结构域。同源分析表明,三疣梭子蟹PtUHRF1的氨基酸序列与其他物种有较高的同源性。qRT-PCR结果显示,PtUHRF1基因在三疣梭子蟹所有组织中均有表达,但在精巢中表达量显著高于其他组织。该基因在胚胎和幼体发育不同时期表达差异显著,在受精卵中的表达量最高,并显著高于胚胎发育其他时期,是多细胞时期表达量的2.5倍。PtUHRF1基因在性腺发育不同时期表达存在显著差异,在卵巢II期表达量达到峰值,之后逐渐下降;在精巢Ⅰ期的表达量最高,随着精巢发育逐渐下降。实验结果表明,PtUHRF1参与了三疣梭子蟹胚胎、幼体和性腺发育调控,为进一步深入研究该基因在三疣梭子蟹及甲壳动物生长发育中的作用提供参考。

摘要: 为研究Relish和Dorsal在三疣梭子蟹免疫过程中所起到的作用,研究利用RACE技术克隆获得三疣梭子蟹Relish(Pt-Rel)、Dorsal基因(Pt-Dor) cDNA全长,并通过实时荧光定量PCR技术分析了Pt-Rel和Pt-Dor基因在健康蟹不同组织及其原代培养的血淋巴细胞在感染不同微生物后的表达情况。结果显示,Pt-Rel cDNA长3254 bp,ORF长2949 bp,编码983个氨基酸,Pt-Dor cDNA长2348 bp,ORF长1911 bp,编码637个氨基酸;蛋白结构预测分析发现Pt-Rel和Pt-Dor均包含RHD (Rel homology domain)及IPT (Immunoglobulin-like fold,Plexins,TranscriPtion factors)Rel/NF-κB家族蛋白经典结构域。Pt-Rel和Pt-Dor与其他节肢动物Relish、Dorsal氨基酸序列具有很高的相似性;在系统进化分析中Pt-Rel和Pt-Dor分别与中华绒螯蟹等甲壳动物的Relish、Dorsal聚在一支,而昆虫类聚在另一支。Pt-Rel和Pt-Dor在检测的6种组织中均有表达,且2个基因均在血淋巴细胞中表达量最高。蟹血淋巴细胞体外感染实验结果表明,不同病原微生物对2个基因表达的影响非常相似,假丝酵母在2h明显诱导了Pt-Rel和Pt-Dor基因的表达,而金黄色葡萄球菌及溶藻弧菌在感染4h后使Pt-Rel和Pt-Dor基因的表达显著上调。上述研究结果表明Pt-Rel和Pt-Dor基因很有可能参与了三疣梭子蟹的抗感染免疫过程。

摘要: 研究采用雨生红球藻(Haematococcus pluvialis)藻粉作为天然虾青素源,配制4种不同虾青素含量(含量分别为0、26.60、41.62和81.37 mg/kg)的饲料(记为饲料1#—4#),对三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)雌体进行为期45d的育肥实验,研究其对雌蟹卵巢发育、色泽、抗氧化能力、免疫性能和生化组成的影响。结果表明:(1)育肥饲料中虾青素含量对雌蟹性腺指数(GSI)和肝胰腺指数(HSI)均无显著影响。(2)肝胰腺、卵巢和头胸甲中的总类胡萝卜素含量、红度(a*)值和黄度(b*)值均随饲料虾青素含量的升高而升高,而3种组织的亮度(L*)值呈显著下降趋势(P<0.05)。(3)对抗氧化指标而言,虾青素添加组(饲料2#—4#)血淋巴超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化物酶(POD)活力均显著低于无虾青素组(饲料1#);血淋巴中的总抗氧化能力(T-AOC)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)及肝胰腺中的SOD和T-AOC活力均随饲料中虾青素水平升高而上升,而血淋巴和肝胰腺中的丙二醛(MDA)含量呈下降趋势。(4)对免疫指标而言,血淋巴和肝胰腺中的酸性磷酸酶(ACP)活力均在饲料4#组最高,而饲料1#组血淋巴中的血蓝蛋白(Hc)含量显著高于其他组(P<0.05)。(5)对生化组成而言,肌肉和肝胰腺中的总脂、总碳水化合物及卵巢中总脂含量均随饲料中虾青素含量的升高呈上升趋势,饲料2#组卵巢中的总碳水化合物含量最高(P<0.05)。综上所述,三疣梭子蟹雌体育肥饲料中添加虾青素对其卵巢发育无显著影响,但可改善色泽和提高其抗氧化能力及可食组织中的总脂和碳水化合物含量,三疣梭子蟹雌体育肥饲料中虾青素适宜含量为50 mg/kg饲料左右。